實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì)，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
 我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

腺病毒B型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)
腺病毒C型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)
腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)
腺病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)
腺病毒F型探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)
腺病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Adenovirus(AV)
嗜水氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Aeromonas hydrophila
斑點(diǎn)氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Aeromonas punctata
滅鮭氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Aeromonas salmonicida
溫和氣單胞菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Aeromonas sobria
氣單胞菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Aeromonas spp.
蜂房小甲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 Aethina tumida
阿菲波菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Afipia spp.
非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 African Swine Fever Virus(ASFV)
放線共生放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Aggregatibacter actinomycetemcomitans
莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Ajellomyces capsulate
類天花病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Alastrim Virus
糞產(chǎn)堿桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Alcaligenes faecalis
1(RT-1狷羚皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 Alcelephine Herpesvirus 1(AlHV-11
阿留申病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 Aleutian Disease Virus(ADV)
交鏈孢霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Alternaria spp.
鵝裂口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 Amidostomum anseri
擬無枝菌酸菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Amycolaptosis spp.
自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR試劑盒 Amycolata autotrophica
中央無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒 Anaplasma centrale
邊緣無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒 Anaplasma marginale
嗜吞噬細(xì)胞無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒 Anaplasma phagocytophilum
無漿體(無形體)通用探針法熒光定量PCR試劑盒 Anaplasma spp.
十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 Ancylostoma duodenale

Mouse receptor activator of nuclear factor kappaB ligand ELISA Kit 96T/48T 小鼠核因子活化因子受體配體(RANKL)
Mouse TpP ELISA Kit 96T/48T 小鼠血栓前體蛋白（TpP）
Mouse GnRH ELISA Kit 96T/48T
Mouse inhibin B ELISA Kit 96T/48T 小鼠抑制素B（INH B0
Mouse thyrotropin-releasing hormone ELISA KIT 96T/48T 小鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)
Mouse CRH ELISA Kit 96T/48T 小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)
Mouse Insulin Receptor β（ISR-β）ELISA KIT 96T/48T 小鼠胰島素受體β（ISR-β）
Mouse HbA1c ELISA Kit 96T/48T 小鼠糖化血紅蛋白（HbA1c）
Mouse lymphocyte function associated antigen-3 ELISA Kit 96T/48T 小鼠LFA-3(CD58)
Mouse HLA-2 ELISA Kit 96T/48T 小鼠組織相容性抗原（HLA-2）
Mouse HLA-1 ELISA Kit 96T/48T 小鼠組織相容性抗原（HLA-1）
Mouse Bone morphogenetic protein 7 ELISA Kit 96T/48T 小鼠骨成型蛋白質(zhì)7（BMP-7）
Mouse HA ELISA Kit 96T/48T 小鼠透明質(zhì)酸(HA)
Mouse 25(OH)D3 ELISA Kit 96T/48T 
Mouse Myoglobin ELISA Kit 96T/48T 小鼠肌紅蛋白(MYO)
Mouse Thromboxane B2 ELISA Kit 96T/48T 小鼠血栓素（TXB2）
Mouse acetylcholine ELISA Kit 96T/48T 
Mouse Tissue Polypeptide Antigen ELISA Kit 96T/48T 小鼠組織多肽抗原（TPA）
鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量PCR試劑盒Mouse t-PA ELISA Kit 96T/48T 小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)
Mouse β-Thromboglobulin ELISA Kit 96T/48T 小鼠β血小板球蛋白(β-TG)
Mouse dihy－drotestosterone ELISA Kit 96T/48T 小鼠雙氫睪酮(DHT)ELISA試劑盒
Mouse SPE(IgG,M) ELISA Kit 96T/48T 小鼠抗抗體(SPE)
Mouse Epinephrine ELISA Kit 96T/48T 小鼠腎上腺素(Epinephrine)
Mouse Noradrenalin ELISA Kit 96T/48T 
Mouse PGE1 Elisa kit 96T/48T 小鼠前列腺素E1(PGE1)

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：
1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。