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小鼠神經(jīng)元細(xì)胞提取物【Mouse Brain : Normal Neuron CellsDerivatives】

小鼠神經(jīng)元細(xì)胞提取物是從小鼠原代神經(jīng)元細(xì)胞提取的，小鼠原代神經(jīng)元細(xì)胞從正常小鼠腦組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)：

1. 試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí)，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl)，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。

金黃色葡萄球菌毒性休克綜合征毒素(TSST)/ 殺白細(xì)胞素(PVL) 雙重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒482-Deoxy,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-ulose,5-dibenzoate1221111

金黃色葡萄球菌腸毒素A(SEA)/B(SEB) 雙重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48D-Mannitol diacetonide177

沙門(mén)菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒48Pemetrexed1372813培美曲塞二鈉

傷寒沙門(mén)菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒484-[2-(2-Amino,7-dihydro-oxoH-pymol[2,3-d]pyrimodin-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester155

副傷寒沙門(mén)桿菌單重?zé)晒?/span>PCR檢測(cè)試劑盒（有甲乙丙三型）48Pemetrexed di35716培美曲塞二鈉
Humanphospholamban,PLNELISAKit人受0蛋白(PLN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  12-Hydroxyjasmonic acid  140631-27-2  中文名：12-羥基酸  分子式：C12H18O4 

Humanphosphoinositide-specificphospholipaseC,PIPLCELISAKit人0酯酰肌醇特異性0酯酶C(PIPLC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  11β-Hydroxy-2'-methyl-5'βH-pregna-1,4-die7,16-d]oxazole-3,20-dione  中文名：  分子式：C23H29NO4 

humanphospho-inhibitorysubunitofNF-κBα,pIKBαELISAKit人0酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  11β,17α-Dihydroxy-6α-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione  6870-94-6  中文名：  分子式：C22H30O4 

Humanphosphoglyceratemase2,PGAM2ELISAKit人0酸甘油酸變位酶2(PGAM2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  11α-Hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione  中文名：11α-羥基-雄甾-4-烯-3,17-二酮  分子式：C19H26O3 

HumanPhosphoglucomase,PGMELISAKit人0酸葡萄糖變位酶(PGM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  11-Hydroxyjasmonic acid  140447-14-9  中文名：  分子式：C12H18O4
戊硫醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  n-Amyl mercaptan  質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC) 牛β羥(βOHB)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineBeta-HydroxybyricAcid,β-OHBELISAKit 96T/48T

Amberlite IR-120陽(yáng)離子交換樹(shù)脂（鈉型）  AmberliteIR-120  質(zhì)量規(guī)格：鈉型 牛白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 96T/48T

乙酸戊酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Amyl acetate  質(zhì)量規(guī)格：for GC,≥99.5%(GC) 牛的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA檢測(cè)試劑盒Bovinerudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit 96T/48T

苯乙酮（標(biāo)準(zhǔn)品）   Acetophenone  質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC) 牛分泌型球蛋白A(sIgA)ELISA檢測(cè)試劑盒BovinesecretoryimmunoglobulinA,sIgAELISAKit 96T/48T

偶氮苯（標(biāo)準(zhǔn)品）  Azobenzene  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛固酮(ALD)試劑盒 Bovine aldosterone,ALD ELISA kit

酸洗石棉  Asbestos acid washed  質(zhì)量規(guī)格：AR 牛過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPARG)試劑盒 Bovine peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARG ELISA kit

苊（標(biāo)準(zhǔn)品）  Acenaphthene  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC) 牛過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)試劑盒 Bovine lipid peroxide,LPO ELISA kit

鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3）  Aluminum solution  質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,介質(zhì):1.0 mol/L HNO3 牛核心蛋白聚糖(DCN)試劑盒 Bovine Decorin,DCN ELISA kit

鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,基體:5%HCl）  Aluminum solution  質(zhì)量規(guī)格：100µg/mL,基體:5%HCl 牛壞死因子α(TNF-α)試劑盒 Bovine Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA kit

(+/-)-兒茶精（標(biāo)準(zhǔn)品）  (±)-Catechin hydrate  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛環(huán)0酸鳥(niǎo)苷(cGMP)試劑盒 Bovine cyclic Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
小鼠神經(jīng)元細(xì)胞提取物價(jià)格羥脯酸（Hyp）測(cè)定試劑盒（堿水解法）（測(cè)動(dòng)物血清、組織、尿液）                    Rhein  478-43-3  中文名：大黃酸  分子式：C15H8O6 

強(qiáng)啡肽   英文名稱(chēng)：   Human Dynorphin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   DYN  3β-Hydroxyergost-5-en-7-one  中文名：  分子式：C28H46O2 

前列腺酸性0酶（PACP）檢測(cè)   Glamine syhetase (GS) detection                 Polypodine B  18069-14-2  中文名：水龍骨甾酮B  分子式：C27H44O8 

前列腺素 E1(PGE1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Peri acid  82-75-7  中文名：周位酸  分子式：C10H9NO3S 

漆酶試劑盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/24樣              4,9-Dihydroxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H14O5

注意事項(xiàng)：

1. 接收到，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。