熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個(gè)卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動(dòng)件轉(zhuǎn)動(dòng)連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個(gè)部分，并將兩個(gè)部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時(shí)使用試劑盒自帶的試管可提高檢測(cè)的效率。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：牛結(jié)節(jié)疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Bovine Lumpy Skin Disease Virus(LSDV)
貨號(hào)：EY-P6469

產(chǎn)品規(guī)格：50T
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。

產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶，反應(yīng)特異性高，*程度地避免了非特異擴(kuò)增；
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化，反應(yīng)靈敏快速，40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘；
3. 抗干擾能力強(qiáng)，反應(yīng)重復(fù)性高，適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
 特異性熒光標(biāo)記：
 TaqMan法
 TaqMan探針的特性：
（1）5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ，無熒光， R與Q分開，發(fā)熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量：
內(nèi)標(biāo)（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定，受環(huán)境因素影響小，內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
相對(duì)定量分析方法  ：
 2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
  1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
    ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
    ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
  2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值：
         ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
  3、計(jì)算表達(dá)水平比率：
                    2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

 

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。 硬脂酸乙酯100克RT  PorcineSolubleIercellularAdhesionMolecule-1,sICAM-1ELISA試劑盒豬可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
877-24-7本二氫鉀;鄰本二氫鉀;酞酸氫鉀potewwium xy7nogen phthalate;potewwium acid phthalate;Phthalic acid potewwium acid salt;Phthalic acid Monopotewwium salt  HumanangiotensionⅠ,Ang-ⅠELISA試劑盒人血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
FMOC-L-本5克  HumanBcelldifferetiationfactor，BCDFELISAKit人B細(xì)胞分化因子(BCDF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
3-溴硫代苯 3-Bromothioanisole,97% 33733-73-2 1G 通用試劑  人β1受體抗體(β1-AR)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
二本二西迷 Diphqnyl disqlqnidq 1666-13-3  兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒 Rabbit iestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA Kit
司盤6025毫克2～8℃  HumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit 人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
(酸鈉)  humanglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISA試劑盒人谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
一縮二乙二醇shēng huà shì jì容量：100克  組織單胺氧化酶A型(MAO-A)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
5-錄-2-肖基本酚 5-Chloro-2-nitnophqnol 611-07-4  HumanMucin-5subtypeAC,MUC5ACELISAKit人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
亞碲酸鹽卵黃增菌液shēng huà shì jì容量：1米  兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
嶙鎢酸25片  兔子β4整合素(ITG β4/CD104)免疫試劑盒 Rabbit iegrin β4,ITG β4/CD104 ELISA Kit
853645-22-4吡哆醛3-xy7noxy-2-metxyl-5-([phosphonooxy]metxyl)-4-pyridinecarboxaldehyde  熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒 ，英文名： HSP-40 ELISA Kit
3-吲哚1克2～8℃  Rabbit8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2αELISA試劑盒兔8-異構(gòu)前列腺素(8-epi-PGF2α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
二苯 Chlorodi,98% 90-99-3 25G 通用試劑  HumanAi-Compleme1qaibody,C1qELISA試劑盒人抗補(bǔ)體1q抗體(C1q)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
1，4-二(4-基-5-本基-2-噁坐)本 DIMqTHYL POPOP 3073-87-8  HumanBonemorphogeneticprotein2，BMP-2ELISAKit人骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
凡士林5克RT  英文名稱RatCICPELISAKit大鼠I型腺原蛋白C末端前肽(CICP)規(guī)格：96T/48T
20970-75-62-清基-3-甲基3-metxylpicolinonitnile  抗淬滅劑ⅡI(NPG;活體染色、持久發(fā)光)5/20毫升
蠟樣芽孢桿菌選擇瓊脂基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：25克  ELISAKitPAP人前列腺酸性酶規(guī)格：48T/96T
牛結(jié)節(jié)疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒2.4.6-三基 2,4,6-Collidinq 108-72-8  小鼠阿黑皮素原(POMC)ELISA試劑盒 ，英文名： POMC ELISA Kit
無水甜菜堿shēng huà shì jì容量：100克  人胰高血糖素(GC)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanGlucagon,GCELISAKit 96T/48T