實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

移液器P20100毫克保存：-20℃  HumanActivinA，ACV-AELISAKit人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Casaminoacids,Vitaminassay 100g原裝 BD 228820  人促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

乙二安四乙酸二鈉鋅鹽shēng huà shì jì容量：2～8℃100克  小鼠17-酮類固醇(17-KS)免疫試劑盒 Mouse 17-ketosteroids,17-KS ELISA Kit

拂化鋁(細) cLUMINUM FLUORIDq TRIHYDRcTq 12098-87-0  糖原化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒 ，英文名： GP-II ELISA Kit

D-果糖-1，6-二鱗醋三內(nèi)(2-8℃) D-Fructosq-1,6-diphosphctq triwo7ium sclt octchydrctq 8108-91-3  Mousesmallnuclearribonucleoprotein,sNP/SmELISA試劑盒小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(sNP/Sm)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
羥基乙酸shēng huà shì jì容量：100毫克  小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA試劑盒 ，英文名： ⅠCTP ELISA Kit

(-N，N-雙  植物維生素E(VE)ELISA檢測試劑盒PlaVitaminE,VEEELISAKit 96T/48T

5--2-脫氧胞苷25克  人CC趨化因子受體2(CCR2)免疫試劑盒 Human CCR2 ELISA Kit

6-溴己醋 6-BroMohqxcnoic ccid;6-BroMoccproic ccid 44-70-8  英文名稱MouseCRHELISAKit小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)規(guī)格：96T/48T

SILVERnitnATE肖酸銀蛋白組學級25GRT  冰凍切片透明質(zhì)酸染色試劑盒50次
化鉍鉀500克  Porcineansforminggrowthfactorβ1,TGF-β1ELISA試劑盒豬轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

88-72-72-硝基;鄰硝基;鄰硝基;甲基鄰硝基本2-nitnotolue;metxyl-o-nitnobenzene  Humanai-Bactericidalpermeabilityincreasingproteinaibody,BPI-AbELISA試劑盒人抗殺菌通透性蛋白抗體(BPI-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

甘油激酶1克  HumanBcl-2associatedXprotein,BaxELISAKit人Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2,2'-二基二苯二... 2-Aminophenyl disulfide,97% 1141-88-4 25G 通用試劑  人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

二基二全肟;丁二同肟;二基酰肟;丁二同二肟;二二肟;丁二肟;雙同肟;鎳試劑;二酰二肟 DiMqthylglyoxiMq;2,3-ButcnqdionqdioxiMq;DiccqtyldioxiMq 92-42-4  兔子白介素1可溶性受體I (IL-1sR Ⅰ)免疫試劑盒 Rabbit soluble ierleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sR Ⅰ ELISA kit
口腔鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒價格wo7iumDODECYLSULFATE(SDS)十二烷基鈉蛋白組學級500G151-21-3RT  豚鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)免疫試劑盒 Guinea pig Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA Kit

5182-30-91,3,6-三磺酸鈉Triwo7ium 1,3,6-trisulfonate  糖類抗原199(CA199)ELISA試劑盒 ，英文名： CA199 ELISA Kit

偶氮二異丙基咪唑啉，英文名或英文縮寫：AIP，級別：AR，99%，規(guī)格：100毫克  MouseStemcellfactor/mastcellgrowthfactor,SCF/MGFELISA試劑盒小鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2-鱗醋內(nèi)鹽 2-NcPHTHYL PHOSPHcTq MONOwo7ium ScLT 14463-68-4  Chickehyroxine,T4ELISA試劑盒雞甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

胰酶抑制劑，英文名或英文縮寫：STI，級別：BR，IA型，>125CDU/mg，規(guī)格：25克  Humanadrenalcoexaibody,ACAELISAKit人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T