人成骨組織提取物【Bone: Normal Human Bone Derivatives】

骨組織是一種堅(jiān)硬的結(jié)締組織，是由細(xì)胞、纖維和基質(zhì)構(gòu)成的。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人體成骨組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

β-Glycerol phosphate β-甘油磷酸二鈉鹽五水   25g/g 3-(Boc-Amino)piperidine99568
β-葡萄糖苷酶   mgLinagliptin66822利拉利汀
矮壯素   1g Telmisartan tert-butyl ester14426
半纖維素酶(Hemicellulase)   5KUFluoronaphthalene3218
崩潰酶   0mg1-Naphthol5
Estradiol  中文名：雌二醇  分子式：C18H24O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISAKit   
Estrone  中文名：雌酮  分子式：C18H22O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISAKit   
Cynatratoside A  中文名：白薇苷A  分子式：C28H40O8  度：98.5%  兔子胰島素(INS)ELISAKit               
Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12  度：%  兔色素上皮衍生因子elisa試劑盒   兔色素上皮衍生因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔色素上皮衍生因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔色素上皮衍生因子試劑盒、兔色素上皮衍生因子 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16  度：98.0%  兔熱休克蛋白90elisa試劑盒   兔熱休克蛋白90試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔熱休克蛋白90試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白90試劑盒、兔熱休克蛋白90 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。
三氧化二鉻(>99%，BR)  Chromium (III) oxide  質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR 高質(zhì)化膠回收試劑盒20
四氧化三鈷(>99%，BR)  Cobalt (II, III ) oxide  質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR 高質(zhì)化聚烯酰胺凝膠粉碎法膠回收試劑盒20
乙酸鈷四水(>99.5%,BR)  Cobaltous acetate, tetrahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,BR 高質(zhì)型ECL化學(xué)發(fā)光顯影試劑盒10
鈷粉(>99%，BR)  Cobaltous powder  質(zhì)量規(guī)格：>99%，BR 高質(zhì)型ECL印跡化學(xué)發(fā)光溶液A液：100毫升B液：500微升1000cm2
銅粉(>99.5%,BR)  Copper powder  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,BR 革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌基因組DNA化試劑盒20
堿式碳酸銅(銅度：52.5~56.5%)  Copper(II) carbonate basic  質(zhì)量規(guī)格：度(銅)：52.5~56.5% 革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌基因組DNA化試劑盒20
氧化銅粉(>99%,BR)  Copper(II) oxide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 革蘭氏陰性細(xì)菌基因組DNA化試劑盒20
焦磷銅  Copper(II) pyrophosphate  質(zhì)量規(guī)格：(Cu):36.0~38.0%,Tech Grade 革蘭氏陰性細(xì)菌基因組DNA化試劑盒20
銅三水(>98%,BR)  Copper(II) tartrate, trihydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 谷氨酸待測(cè)樣品處理試劑盒20
2'-脫氧腺苷5'二三鈉鹽(>97%,BR)  dADP  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR 谷氨酰胺待測(cè)樣品處理試劑盒20
人成骨組織提取物價(jià)格兔基質(zhì)金屬蛋白酶-12(rabbit MMP-12)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Oxododecanedioic acid  30828-09-2  中文名：  分子式：C12H20O5  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
兔基質(zhì)金屬蛋白酶-1(rabbit MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  中文名：  分子式：C12H14N2O2  度：98.0%
兔基質(zhì)金屬蛋白酶 2   英文名稱(chēng)：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   MMP-2  5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C5H3ClO2S  
兔基質(zhì)金屬蛋白酶 1   英文名稱(chēng)：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   MMP-1  5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C5H3ClO2S  度：98.0%
兔基質(zhì)金屬蛋白9（MMP-9）ELISA試劑盒     4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  122475-42-7  中文名：  分子式：C18H24N4O18  度：%  關(guān)鍵詞：

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。