PrimaCell™小鼠支氣管成纖維細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA試劑盒 ，英文名： MHCⅠ/H-2Ⅰ ELISA Kit  58479-68-8桔梗皂苷D規(guī)格  Platycodin D

小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA檢測試劑盒Mouseproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 96T/48T  66663-90-9桔梗皂苷D2  Platycodin D2

人抗Smith抗體(Sm)試劑盒 Human ai-Smith aibody ELISA Kit  78763-58-3去芹糖桔梗皂苷D說明書  Deapio platycodinD

Rat17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit大鼠17羥孕同(17-OHP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  6537-80-0菊苣酸品牌  Cichoric Acid

載玻片細胞MAPK蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  481-53-8橘紅素規(guī)格  Tangeretin
54848-30-5原纖細薯蕷皂苷說明書  Protogracillin(p)    豬纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒 Porcine plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1 ELISA Kit

548-37-8山茱萸苷規(guī)格  Verbenalinp   豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒 Porcine plasminogen activator inhibitor,PAI ELISA Kit

548-19-6異銀杏素規(guī)格  Isoginkgetin  豬細胞色素C氧化酶(COX)試劑盒 Pig cytochrome C oxidase,COX ELISA kit

548-04-9金絲桃素品牌  Hypericin   豬細胞色素c還原酶(CCR)試劑盒 Pig cytochrome c reductase,CCR ELISA kit

5471-51-2覆盆子酮規(guī)格  4-(4-hydroxyphenyl)-2-butanone    豬細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒 Porcine iercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit
犬肌紅蛋白(MYO/MB)試劑盒 Dog Myoglobin,MYO/MB ELISA Kit  57-22-7長春新堿規(guī)格  Vincristine

英文名稱HumanVasoactiveIestinalPeptide(VIP)人血管活性腸肽(VIP)規(guī)格：96T/48T  4168-17-6長春質(zhì)堿  Catharanthine hemitartrate

化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒20  38390-45-3脫水長春堿說明書  3',4'-Anhydrovinblastine

RatIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISA試劑盒大鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  143-67-9硫酸長春堿品牌  Vinblastine sulfate

小鼠印度刺猬因子(IHH)ELISA試劑盒 ，英文名： IHH ELISA Kit  865-21-4長春堿規(guī)格  vinblastine
PrimaCell™小鼠支氣管成纖維細胞試劑盒價格31008-19-2辛夷脂素  Fargesin   魚類白介素1α(IL-1α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

31008-18-1木蘭脂素規(guī)格  Magnolin    魚骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA檢測試劑盒FishOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit 96T/48T

30964-13-71,5-二咖啡酰奎寧酸說明書  1,5-Dicaffeoylquinic acid   魚肝油維生素A含量熒光定量檢測試劑盒20

3081-61-6L-茶氨酸規(guī)格  L-Theanine   游離脂肪酸化學(xué)比色法定量檢測試劑盒50

306-08-1高香草酸說明書  Homovanillic acid   油脂DNA萃取試劑盒10