人食管上皮細胞提取物【Human Esophageal: Normal Esophageal Epithelial Cell Derivatives】

人食管上皮細胞提取物是從人原代食管上皮細胞提取的，人原代食管上皮細胞從正常人食管上皮組織制備。正常人食管組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

轉(zhuǎn)基因植物NOS終止子單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48N-Acetylcaprolactam18881N-乙酰己內(nèi)酰胺

玉米轉(zhuǎn)基因Bt176單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒484-Aminoantipyrine1983/7/84-氨基安替比林

玉米轉(zhuǎn)基因Bt11單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒 482-Amino-chlorobenzophenone71992-氨基-氯二苯甲酮

大豆特異性基因Lectin單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒482-AcetylH-Isoindole,3(2H)-Dione197192-乙酰基H-異吲哚,3(2H)-二酮

玉米特異性基因Invertase單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48DL-Alanyl-DL-Mine19993DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸
PlasmidMaxiKit   10T                 Uzarigenin digitaloside  61217-80-9  中文名：  分子式：C30H46O8 

PlanNAplus   40ml  Uzarigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H46O8 

PH值快速測試盒   PH quick test case                 Ranitidine  66357-35-5  中文名：雷尼替丁  分子式：C13H22N4O3S 

PH精密試紙   PH precision test paper                 Risperidal  106266-06-2  中文名：利培酮  分子式：C23H27FN4O2 

PH廣范試紙   PH wide range test paper  Risperidal  106266-06-2  中文名：利培酮  分子式：C23H27FN4O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
紫杉醇  Paclitaxel  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,用于細胞培養(yǎng),藥劑造模 Ratsolubleierleukin-1receptorⅠ,IL-1sRⅠELISA試劑盒大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫杉醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  Paclitaxel  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISAKit大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鹽酸帕洛諾司瓊  Palonosetron HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細胞培養(yǎng) Ratsolubleierleukin-1receptorⅡ,IL-1sRⅡELISA試劑盒大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硫酸巴龍霉素  Paromomycin Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：≥675 U/mg,USP28 RatsolubleIerleukin2recepter,IL-2sRELISAKit大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硫酸巴龍霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Paromomycin Sulfate  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 RatsolubleIerleukin2recepter,IL-2sRELISA試劑盒大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

甲磺酸帕珠沙星  Pazufloxacin Mesilate  質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR Ratsolubleierleukin-2receptor,IL-2sRαELISAKit大鼠白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

甲磺酸帕珠沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pazufloxacin Mesilate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Ratsolubleierleukin-2receptor,IL-2sRαELISA試劑盒大鼠白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

甲磺酸培氟沙星  Pefloxacin mesylate dihydrate  質(zhì)量規(guī)格：≥99.0% ,水合物 Ratsolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISAKit大鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

甲磺酸培氟沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pefloxacin mesylate dihydrate  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Ratsolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISA試劑盒大鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

培美曲塞二鈉  Pemetrexed Di  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,水合物 RatsolubleIerleukin6receptor,sIL-6RELISAKit大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人食管上皮細胞提取物Senkyunolide E  中文名：  分子式：C12H12O3  度：%  兔子球蛋白A(IgA)ELISAKit  

Dihydrosenkyunolide C  中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H14O3  度：98.0%  兔子可溶性細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISAKit  

Glyceryl hexacosanoate  中文名：  分子式：C29H58O4  度：%  兔子可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISAKit  

Digalactosyldiacylglycerol  中文名：雙半乳糖二酰甘油  分子式：C49H88O15  度：%  兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISAKit               

4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  中文名：  分子式：C18H24N4O18  度：%  兔子可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)ELISA試劑盒

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。