大鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞【Rat Lung: Normal Artery Endothelial Cells】

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(不含瓊脂)100克  細菌乳糖酵解溴百里酚藍(BTB)瓊脂平板50個

蛋白胨水培養(yǎng)基Peptone Water Medium  RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit兔子白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

抗生Ⅶ號培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：25克  豚鼠環(huán)鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒 ，英文名： cGMP ELISA Kit

肌酸鹽酸鹽 Sarcosine methyl ester hydrochloride,... 13515-93-0 5G 通用試劑  Human hepatitis D virus IgG (HDV IgG) ELISA Kit 人丁型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA試劑盒

三錄化典 Iodinq trichloridq 862-44-1  MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 猴載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
碳酸鋇shēng huà shì jì容量：25克  人足細胞標記蛋白(PCX)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

RNASIN RNA酶 INHIBITOR(-20℃)NA  Rat lipolysaccharide binding protein (LBP) ELISA Kit 大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒

膽固醇酯酶(豬胰)100克  HumanCollageypeⅢ,ColⅢELISAKIT 人Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

2-?；?/span>-2-甲... 2-Acrylamido-2-methyl-1-propanesulfoni... 15214-89-8 100G 通用試劑  HumanHemolyticcompleme,HcELISA試劑盒人溶血補體(Hc)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

無水溴化 litxium bromidq 7220-32-8  組織甘油激酶(Glycerolkinase)活性酶連續(xù)反應比色法定量檢測試劑盒20次
葡萄球菌增菌肉湯100毫克2～8℃  MouseHeatShockProtein40,Hsp-40ELISA試劑盒小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(曲拉通X-114)  ELISAKitFDP兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物規(guī)格：48T/96T

酵母粉瓊脂shēng huà shì jì容量：1米  Camelansforminggrowthfactorsβ2,TGFβ2ELISAKit駱駝轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4-羌基間本二加醋 4-xy7noxyisophthclic ccid 636-46-4  人寡聚蛋白(oligomeric)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

肌激酶shēng huà shì jì容量：5克  小鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)免疫試劑盒 Mouse Bladder tumor aigen,BTA ELISA Kit
大鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞價格鄰啰啉150ku保存：-20℃  PorcineOrexieceptor,OXRELISA試劑盒豬食欲素受體(OXR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

金橙OOONA  HumanAndrostenedione,ASDELISA試劑盒人雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BOVINESERUMALBUMIN,20MG/ML牛血清白蛋白溶液生物技術(shù)級5MLCOLD  Humanasialoglycoproteieceptor,AGSPRELISAKit人去唾液酸糖蛋白受體(AGSPR)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

血粉蛋白胨 Blood meal peptone Null 250G 通用試劑  人β甘露糖苷酶(β Manase)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

二流代酰安 Dithiooxcmidq 79-40-3  兔子高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)免疫試劑盒 Rabbit High density lipoprotein cholesterol,HDL-C ELISA Kit