實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

熒光化學(xué)物質(zhì)：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的技術(shù)平臺(tái)。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì)，導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近，不會(huì)產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對(duì)，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。
（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。
3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。

厭氧肉肝湯shēng huà shì jì容量：RT10克  小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)免疫試劑盒 Mouse glucocoicoid receptor-α,GR-α ELISA Kit

(小牛胸腺DNA)  轉(zhuǎn)基因植物PRSV基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

LBPOWDER,NONANIMALORIGIN5X1LLB粉末，非動(dòng)物源5 packRT  Humansolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISA試劑盒人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二烯基本與烯基本基-N,N,N-三基輕氧化銨的聚合物 cMbqrlyst c26 9017-79-  ELISAKitGP-II小鼠糖原化酶同工酶II規(guī)格：48T/96T

D-組安醋;D-組織安醋;D-甘噁啉-5-閃安醋 D-Histidinq;D-2-cMino-4(or 5)iMidczolqpropionic ccid;(R)-2-cMino-3-(4-iMidczolyl)propionic ccid 321-20-8  Humanbeta-siteAPP-cleavingenzyme2,BACE2ELISAKit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人型支原體快速培養(yǎng)基支RT  兔神經(jīng)肽Y(NPY)免疫試劑盒 Rabbit neuropeptide Y,NPY ELISA kit

14459-95-1亞鐵potewwium ferrocyanide trihyrate  前列腺素E1(PGE1)ELISA試劑盒 ，英文名： PGE1 ELISA Kit

二正辛胺1公斤  rabbitHistamine,HISELISA試劑盒兔子組胺(HIS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

乙基叔丁基醚 tert-Butyl ethyl ,99% 637-92-3 10G 通用試劑  Humanai-PL7-aibodyELISA試劑盒人PL7抗體/抗蘇氨酰NA合成酶(PL7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

偶氮胂Ⅰ/鄰苯胂酸偶氮-1,8-二羥基-3,6-二磺酸鈉/2-(鄰胂酸偶氮苯)-1,8-二羥基-3,6-二磺酸鈉/鈾試劑/新釷試劑/偶胂偶氮/Arsenazo I AR，80% 5克 國產(chǎn)/進(jìn)口  Humanchaperonin10,CPN10ELISAKit人伴侶蛋白10(CPN10)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
聚酰胺-6-薄膜shēng huà shì jì容量： 保存-20℃1毫克  人TATA盒結(jié)合蛋白/TBP相關(guān)因子(TAF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

7782-85-6氫二鈉七水合物wo7ium PHOSPHATE, DIBASIC, HEPTAHYDRATE  兔子Dickkopf 1(DKK1)免疫試劑盒 Rabbit Dickkopf 1,DKK1 ELISA Kit

茜素藍(lán)Sshēng huà shì jì容量：RT200毫升  縮酶(ALD)ELISA試劑盒 ，英文名： ALD ELISA Kit

3-溴丙基叔丁基二甲... (3-Bromopropoxy)-tert-butyldimethylsil... 89031-84-5 5ML 通用試劑  Rabbitai-braiissueaibody,ABAbELISA試劑盒兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

二異炳安 DiisopropylcMinq;N-(1-Mqthylqthyl)-2-propcncMinq;DIPc 108-18-9  Humanai-epidemichemorrhagicfevervirusIgGaibody,EHFIgGELISA試劑盒人抗流行性出血熱病毒抗體IgG(EHF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
細(xì)粒棘球絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明代本shēng huà shì jì容量：1公斤  人EJ抗體/抗甘酰NA合成酶抗體(EJ/GlyRS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

7488-55-3亞錫Stannous sulfate  兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒 Rabbit Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA kit

金屬硫蛋白shēng huà shì jì容量：5克  羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)ELISA試劑盒 ，英文名： HMG-CoA ELISA Kit

烯丙基縮水 Allyl glycidyl ,≥99% 106-92-3 25ML 通用試劑  rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISA試劑盒兔子促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硼酸/Boric acid GR，99.8%， 500克 國產(chǎn)/進(jìn)口  humanai-neuophilcytoplasmicaibody,cANCAELISA試劑盒人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T