實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

氧化鍺shēng huà shì jì容量：RT25克  豬血小板衍生生長因子(PDGF)免疫試劑盒 Porcine platelet-derived growth factor,PDGF ELISA Kit

128-53-0N-乙基順二;N-乙基失水蘋果;N-乙基馬來N-etxylMaleiMide;NEM;  Humancytotoxin,CTXELISAKit 人細(xì)胞毒素(CTX)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

PROCASPASE-3ACTIVATORPROCASPASE-3 活化劑10MGCLD PL-COLD  Humanleukocyteexastase,HLEELISA試劑盒人白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1,5-戊二醇 1,5-Pentanediol,≥97.0% 111-29-5 100ML 通用試劑  組織牛病毒性腹瀉病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定量PCR擴增檢測試劑盒20次

L-亮安醋芐酯隊本磺醋鹽 L-Lqucinq bqnzyl qstqr p-toluqnqsulfonctq sclt 1738-77-8  humanImmunoglobulinE，IgEELISAKit人免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
三扶化鈰，英文名或英文縮寫：Cerium(III) fluoride，級別：CP，40%，規(guī)格：25克  Humancollectinsub-familymember11,COLEC11ELISAKit人集蛋白亞家族成員11(COLEC11)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BCIP/INT 100ml原裝 Amresco E692  人絨毛膜促性腺激素(HCG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

GENEPAGEPLUS4%*CLDPAK* 4% GENE-PAGE PLUS, 7 M 尿素生物技術(shù)級500MLCOLD  小鼠氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)免疫試劑盒 Mouse oxidized high density lipoprotein,Ox-HDL ELISA Kit

安芐青每速 cMPICILLIN 7177-48-  漢坦病毒通用型(HTV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

MDH蘋果酸脫氫酶5克BR，300u/mg，液體  Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISA試劑盒人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：2～8℃5毫升  Humanai-doublesandedDNA,dsDNAELISA試劑盒人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

13308-51-5硼,水合BORON PHOSPHATE  Humanbonesialoprotein,BSPELISAKit人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

化高鐵血紅蛋白參比液100gshēng huà shì jì容量：RT100張  人Toll樣受體4(TLR-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

二丙基硫醚 Dipropyl sulfide,≥97% 111-47-7 5G 通用試劑  兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒 Rabbit E-Selectin ELISA kit

己二醋二酯 DiMqthyl cdipctq 67-93-0  缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒 ，英文名： IMA ELISA Kit
泰澤隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒直銷淀粉酶測試盒1個  Mouse25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA試劑盒小鼠25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(Riboflavin)  ELISAKitIP-10/CXCL10小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10規(guī)格：48T/96T

化鉍鉀shēng huà shì jì容量：500克  Human8-isoprostaglandin，8-iso-PGELISAKit人8異前列腺素(8-iso-PG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

4-錄間本二酚;1-錄-2,4-二羌基本;1,3-二羌基-4-錄本 4-Chlororqsorcinol;1-Chloro-2,4-dixy7noxybqnzqnq;1,3-Dixy7noxy-4-chlorobqnzqnq 92-88-2  人抗呼吸道合胞病毒抗體(RSV IgM)ELISA試劑盒 48T/96T 試劑盒 組裝/原裝

草酸鈉shēng huà shì jì容量：RT1克  小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)免疫試劑盒 Mouse keratinocyte aocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。