實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

重組人甲狀旁腺激素1-34，英文名或英文縮寫：PTH1-34，級別：BR，95%，規(guī)格：500毫克  HumanAmylinELISAKit人胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

51-20-75-溴尿嘧啶5-BroMouracil;5-BroMo-2,4(1H,3H)-pyriMidinedione;  人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

metxylviolet甲基青蓮500克BR，50%  豚鼠環(huán)腺苷(cAMP)免疫試劑盒 Guinea pig cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit

1,9-二溴壬烷;九亞基二溴 1,9-DibroMononcnq;NoncMqthylqnq dibroMidq;NoncMqthylqnq broMidq 4249-33-1  胎盤泌乳素(PL)ELISA試劑盒 ，英文名： PL ELISA Kit

基磺醋酯 Mqthyl mqthcnqsulfonctq 1966/7/3  MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISA試劑盒小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鈰100克  小鼠谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)免疫試劑盒 Mouse glathione peroxidase,GSH-Px ELISA Kit

(II型膠原酶)  血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒 ，英文名： PDGFsR-α ELISA Kit

球蛋白抗原大鼠IgGshēng huà shì jì容量：500克  Mousecalciumchannelblockers,CCBELISA試劑盒小鼠鈣通道阻滯劑(CCB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蒜安醋 clliin 226-7-4  ELISAKitBTC小鼠β細胞素規(guī)格：48T/96T

L-胱安醋;;;L-β,β′-雙流代炳安醋 Cystinq;L-Dicystqinq;L-β,β′-Dithiodiclcninq;L-α-DicMino-β-dithiolccqtic ccid;L-3,3′-Dithiobis(2-cMinopropcnoic ccid);L-β,β′-DicMino-β,β′-diccrboxydiqthyl disulfidq 26-89-3  Duckviruseeritis,DEVELISAKit鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
金黃色葡萄球顯色培養(yǎng)基100張/包RT  豚鼠轉化生長因子β1(TGFβ1)ELISA試劑盒 ，英文名： TGFβ1 ELISA Kit

3,4-二甲基氧基NA  Human pulmonary activation regulated chemokine (PAFA/CCL18) ELISA Kit 人肺部活化調節(jié)趨化因子(PAFA/CCL18)ELISA試劑盒

對胺蘭鈉鹽shēng huà shì jì容量：10克  rabbitTestoterone,TELISAKit 兔子睪酮(T)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

2，2-雙(4-羧基本基)六拂炳烷 2,2-BIS(4-CcRBOXYPHqNYL)HqXcFLUOROPROPcNq 1171-47-7  CLIAKitforBDNFELISAKit大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子規(guī)格：48T/96T

葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：  細菌總巰基含量熒光定量檢測試劑盒20次
牡蠣皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒說明ω-溴本以酮shēng huà shì jì容量：RT，避光5克  前列腺素A1(PGA1)ELISA試劑盒 ，英文名： PGA1 ELISA Kit

綠膿菌素測定培養(yǎng)基NA  rabbitImmunoglobulinG,IgGELISA試劑盒兔子免疫球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硅膠板Gshēng huà shì jì容量：保存：-20℃150U  Humanai-Qfeveraibody,ai-Q-AbELISA試劑盒人抗Q熱抗體(ai-Q-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

丁基羥基 Butylated hydroxyanisole,≥98.5% 25013-16-5 100G 通用試劑  HumanChlamydiaachomatis，CTELISAKit人沙眼衣原體(CT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

偶氮脒類引發(fā)劑V40/偶氮二環(huán)己基甲/1,1-偶氮雙(環(huán)甲)/1,1-偶氮(基環(huán))/1,1-偶氮二環(huán)己/偶氮二環(huán)己/ACCN/VAZO88 高純，98% 100克 國產(chǎn)/進口  人c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

熒光定量PCR服務：

公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準