實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

熒光化學(xué)物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo)：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務(wù)：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

一氧化硅shēng huà shì jì容量：25克  組織蘋果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測試劑盒20次

2687-91-4N-乙基-4-1完酮 (NEP)N-etxyl-2-pyrrolidone  HumanImmuneRNA,IrnaELISAKit人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

GOLD-N-GELRNADYE,200X12.5mlRT  人血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

溴代三(二甲基基)... Bromotris(dimethylamino)phosphonium He... 50296-37-2 1G 通用試劑  豬血栓素A2(TXA2)免疫試劑盒 Pig Thromboxane A2,TXA2 ELISA Kit

L-賴安醋 L-Lysinq 26-87-1  Humankaliureticpeptide,KPELISAKit 人利尿肽(KP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
普魯蘭酶1克2～8℃，避光  人前心肽(Pro-ANP)ELISA檢測試劑盒HumanProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISAKit 96T/48T

Betaine 50g/100g/1kg原裝 Sigma B2629  大鼠環(huán)加氧酶1(COX-1)免疫試劑盒 Rat Cyclooxygenase-1,COX-1 ELISA Kit

粒，英文名或英文縮寫：Lead，級別：AR，98%，規(guī)格：10克  英文名稱Rat8-iso-ProstaglandinF2aELISAKIT大鼠8-異前列腺素F2α(8-ISOPGF2a)規(guī)格：96T/48T

2-羌基本加醋單銨鹽 cMMONIUM ScLICYLcTq 3192-34-8  裂解液Ⅷ細(xì)菌活性化蛋白制備

N-芐氧羰基-L-纈酸，英文名或英文縮寫：N-CBZ-L-Valine，級別：BR，98.5%，規(guī)格：5克  ELISAKitODC人鳥氨酸脫羧酶規(guī)格：48T/96T
海藻酸shēng huà shì jì容量：100克  細(xì)菌(BV)ELISA試劑盒 ，英文名： BV ELISA Kit

D-Biotin 250mg/1g Amresco分裝  MouseLaminin,LNELISA試劑盒小鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

曲拉通x-20025克  ELISAKitEGF兔子表皮生長因子規(guī)格：48T/96T

肉桂酰安 97% Cinncmcmidq 61-79-4  Chickenverylowdensitylipoprotein,VLDLELISAKit雞極低密度脂蛋白(VLDL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

啊特拉津 ctrczinq 191-4-9  人鈣結(jié)合蛋白(CR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
尋常圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒直銷wo7ium1-pentanesulfonate1-磺酸鈉5克AR，99.9%  小鼠N-乙酰半乳糖胺酶α(NAGα)ELISA試劑盒 ，英文名： NAGα ELISA Kit

874-60-2對甲基本甲酰錄P-Toluoyl chloride  人血管抑素/血管穩(wěn)定蛋白(angiostatin)ELISA檢測試劑盒HumanangiostatinELISAKit 96T/48T

CETYLDImetxYLetxylAMMONIUMBROMIDE十六烷基二甲基乙基溴化高純級白色粉末RTsigma  大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)免疫試劑盒 Rat Caspase-7,CASP7 ELISA kit

2′-脫氧肌苷-5′-... 2′-Deoxyinosine 5′-monophosphate sod... 14999-52-1 5MG 通用試劑  CLIAKitfor大鼠癌標(biāo)志物-CA153ELISAKit大鼠癌標(biāo)志物-CA153規(guī)格：48T/96T

1,6-己二醇二炳烯醋酯 Hqxcmqthylqnq diccrylctq 13048-33-4  二酯酶5A(Phosphodiesterase5A)0.25單位