人食管癌組織源成纖維細胞提取物【Human Cancer: Esophageal Cancer Fibroblast Derivatives】

人食管癌組織源成纖維細胞提取物是從人食管癌組織源成纖維細胞提取的，人食管癌組織源成纖維細胞從人食管癌組織制備。人食管癌組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

犬狂犬抗體ELISA檢測試劑盒192Methyl 3-amino-[[(2'-cyanobiphenyl-yl)methyl]amino]benzoate13648

羊（sheep）羊痘病毒抗體（Capripox-Ab）ELISA檢測試劑盒19211β-Hydroxy'-methyl'βH-pregna,4-die7,16-d]oxazole,-dione136498

口蹄疫O型抗體ELISA檢測試劑盒（牛羊豬通用，阻斷法）192Deflazacort144847地夫可特

肺炎支原體單重熒光PCR檢測試劑盒48Cortisone acetate19/4/4醋酸可的松

銅綠假單胞菌單重熒光PCR檢測試劑盒48Hydroxyprogesterone686羥孕酮
Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C22H17N3O4  度：98.0%  小鼠肺表面活性物質(zhì)相關蛋白A   英文名稱：   Mouse Pulmonary surfacta associated protein type A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SP-A

Ethyl2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C14H18N2O6  度：98.0%  小鼠肺表面活性物質(zhì)相關蛋白D   英文名稱：   Mouse Pulmonary surfacta associated protein type D   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SP-D

Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate  中文名：群勃龍環(huán)己甲基碳酸酯  分子式：C26H34O4  度：98.0%  小鼠S100鈣結合蛋白A7   英文名稱：   Mouse S100 Calcium Binding Protein A7   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   S100A7

Ceftiofur hydrochloride  中文名：頭孢噻呋鹽酸鹽  分子式：C19H18ClN5O7S3  度：98.0%  小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸(AcSDKP)ELISA試劑盒  

Cefquinome  中文名：頭孢喹咪  分子式：C23H24N6O5S2  度：98.0%  小鼠N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒
米帕明/丙咪嗪（標準品）  Clomipramine HCL   質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品 超氧化物歧化酶(SOD)酵母/真菌裂解樣品制備試劑盒50

硫酸氫氯吡格雷 I型  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,I型 超氧化物歧化酶(SOD)細胞裂解樣品制備試劑盒50

硫酸氫氯吡格雷 II型(標準品)  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,標準品 超氧化物歧化酶(SOD)細胞裂解樣品制備試劑盒50

硫酸氫氯吡格雷 II型  Clopidogrel Bisulfate  質(zhì)量規(guī)格：含量97.0%-101.5%，II型 超氧化物歧化酶(SOD)細菌裂解樣品制備試劑盒50

萘丁美酮/萘普酮  Nabumetone  質(zhì)量規(guī)格：>99% 超氧化物歧化酶(SOD)植物裂解樣品制備試劑盒50

萘丁美酮/萘普酮（標準品）  Nabumetone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品 超氧化物歧化酶(SOD)植物裂解樣品制備試劑盒50

地瑞拉韋  Darunavir  質(zhì)量規(guī)格：>98% 超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50

沃氏物  Methoxydienone  質(zhì)量規(guī)格：含量≥85% 超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50

DL-α-羥基戊二酸二鈉  DL-α-Hydroxyglutaric acid di salt   質(zhì)量規(guī)格：98%,GC,進分sigma 94577 超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液1毫升/500毫摩爾

地美胺  Demecarium Bromide   質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 沉淀法去內(nèi)試劑盒20
人食管癌組織源成纖維細胞提取物價格β-Sitosterol  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O    應急反應生長因子-1   英文名稱：   Early growth response 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EGR-1

β-Anhydrouzarigenin  中文名：  分子式：C23H32O3    轉(zhuǎn)錄因子E2F1   英文名稱：   anscription factor E2F1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   E2F1

α-Tocopherolquinone  中文名：  分子式：C29H50O3    腺來源的內(nèi)皮生長因子   英文名稱：   endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EG-VEGF

α-Spinasterone  中文名：  分子式：C29H46O    中性粒細胞蛋白酶抑制劑Elafin   英文名稱：   neuophil elastase inhibitor Elafin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Elafin

α-Spinasterol glucoside  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6    游離脂肪酸（NEFA）檢測   Total iron binding (TIBC) detection