人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞取物【Human Skin: Normal Epidermal KeratinocytesDerivatives】

人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞提取物是從人原代表皮角質(zhì)形成細(xì)胞提取的，人原代表皮角質(zhì)形成細(xì)胞從正常人表皮角質(zhì)形成組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

犬細(xì)小抗原膠體金快速檢測(cè)試紙條Rasagiline mesylate1617359甲磺酸雷沙吉蘭

犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)ELISA檢測(cè)試劑盒96Ranolazine956355雷諾嗪

動(dòng)物包蟲(chóng)抗體間接ELISA檢測(cè)試劑盒96Ranolazine dihydrochloride956356鹽酸雷諾嗪

病毒通用型RT-PCR檢測(cè)試劑盒/Ranitidine663575雷尼替丁

病毒H5亞型RT-PCR檢測(cè)試劑盒/Ranitidine hydrochloride663579鹽酸雷尼替丁
Methyl 4'-bromomethyl biphenyl-2-carboxylate  中文名：  分子式：C15H13BrO2  度：98.0%  小鼠C反應(yīng)蛋白   英文名稱：   C-reactive protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CRP

Methyl 4'-methylbiphenyl-2-carboxylate  中文名：  分子式：C15H14O2  度：98.0%  小鼠CXC趨化因子受體3   英文名稱：   CXC chemokine receptor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CXCR3

4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  中文名：  分子式：C12H14N2O2  度：98.0%  小鼠CXC趨化因子配體16   英文名稱：   CXC chemokine ligand 16   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CXCL16

Androstenediol  中文名：雄烯二醇  分子式：C19H30O2  度：98.0%  小鼠CXCL1/KC   英文名稱：   CXC chemokine ligand 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   CXCL1/KC

Testosterone benzoate  中文名：17-安息香酸雄烯醇酮  分子式：C26H32O3  度：98.0%  小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISAKit
鹽酸奈福泮（標(biāo)準(zhǔn)品）  Nefopam HCl  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠酪酸羥化酶(TH)ELISA試劑盒 ，英文名： TH ELISA Kit

甲睪酮; 甲基素（標(biāo)準(zhǔn)品）  17-Methyltestosterone  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠類5α還原酶1(SRD5α1)ELISA試劑盒 ，英文名： SRD5α1 ELISA Kit

布美他尼;丁苯氧酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Bumetanide  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠類胰蛋白酶(TPS)ELISA試劑盒 ，英文名： TPS ELISA Kit

氨甲環(huán)酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tranexamic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

氨甲環(huán)酸  Tranexamic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISAKit 96T/48T

丙谷胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Proglumide  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒 ，英文名： G-CSF ELISA Kit

GW501516  GW501516(GSK-516; GW1516)  質(zhì)量規(guī)格：>98%,高度選擇性的PPARβ/δ激動(dòng)劑 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISAKit 96T/48T

布洛芬（標(biāo)準(zhǔn)品）  Ibuprofen  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA試劑盒 ，英文名： GM-CSF ELISA Kit

比沙可啶（標(biāo)準(zhǔn)品）  Bisacodyl  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)ELISA試劑盒 ，英文名： GMCSF/CSF2 ELISA Kit

醋酸氯己定（標(biāo)準(zhǔn)品）  Chlorhexidine Acatate  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 小鼠粒細(xì)胞趨化蛋白2(GCP2)ELISA試劑盒 ，英文名： GCP2 ELISA Kit
人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞取物α-Spinasterol glucoside  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6  度：97.0%  兔抗腦組織抗體elisa試劑盒   兔抗腦組織抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔抗腦組織抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗腦組織抗體試劑盒、兔抗腦組織抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Clerosterol glucoside  中文名：赤桐甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6  度：93.0%  兔抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)ELISA試劑盒  

Thevebioside  中文名：  分子式：C36H56O13  度：97.0%  兔抗單核細(xì)胞抗體(AMA)ELISA試劑盒  

17α-Neriifolin  中文名：  分子式：C30H46O8  度：98.0%  兔堿性0酸酶(ALP)ELISA試劑盒  

Ergosterol peroxide glucoside  中文名：過(guò)氧化麥角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O8  度：85.0%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA試劑盒

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。