實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質(zhì)：

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料?，F(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

溴化四庚，英文名或英文縮寫：Tetraheptylammonium bromide，級別：4N，99.8%，規(guī)格：1克  生長調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒 ，英文名： GROγ/CXCL3/MGSA ELISA Kit

6020-87-7肌酸Creatine monohydrate  PorcineC-reactiveprotein,CRPELISA試劑盒豬C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

偶氮二異丙基咪唑啉鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：AIBI，級別：AR，規(guī)格：500毫克  human3-hydroxy-3-methylglaryl-CoenzymeAsyhase1,HMGCS1ELISA試劑盒人3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1(HMGCS1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

赤芝酸E Lucidenic acid E (HPLC,≥98%) 98665-17-9 5MG 通用試劑  Humanai-myelinassociatedglycoproteinaibody,MAGAbELISAKit人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAGAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Dowex 508 離子交換樹脂 DOWqX(R) 50  11119-67-8  人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
葡萄糖酸鹽，英文名或英文縮寫： gluconate，級別：BR，土豆來源，規(guī)格：10克  HumanComplemefragme3c,C3cELISA試劑盒人補體7(C7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硅酮　OV-61Silicone OV-61  組織CASEINKINASE2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

正-辛基谷酸，英文名或英文縮寫：OGP，級別：精制級，15000-50000u/g，規(guī)格：100克  Humanprothrombinfragme1+2，F1+2ELISAKit人凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA規(guī)格：96T/48T

1-胺-4-磺酸鈉 4-Ami-sulfonic acid sod... 130-13-2 25G 通用試劑  小鼠50kDa核孔蛋白(NUP50)ELISA試劑盒 ，英文名： NUP50 ELISA Kit

熒光速二醋鹽 FLUORqSCqIN DIcCqTcTq 296-09-8  人雌激素(E)ELISA檢測試劑盒Humanesogen,EELISAKit 96T/48T
甲醛酸，英文名或英文縮寫：Glyoxylic acid，級別：AR，98%，規(guī)格：25克  HumanProinsulin,PIELISAKit 人胰島素原(PI)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

5994-61-6N-(膦酰甲基)亞基二乙酸N-(Carboxymetxyl)-N-(phosphonometxyl)-glycine  HumanDeoxypyridinolinecrosslinks,DPDELISA試劑盒人脫氧膠原交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

CASEIN酪蛋白高純級500G9000-71-9COLD  組織KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次

(S)-1-本基丁安 98+% (S)-1-Phqnylbutylcminq 3789-60-4  Humanplacealprotein，PPELISAKit人胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

細胞溶解酶(2-8℃) LYTICcSq 37340-27-1  兔子細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
地霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒直銷鉍shēng huà shì jì容量：25克  Human pulmonary surfacta associated protein D (SP-D) ELISA Kit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒

328-84-73,4-二錄三扶3,4-Dichlorobenzotrifluoride  rabbithepatocytegrowthfactor,HGFELISAKit 兔子肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

十氫奈1克  CLIAKitforBDNF(HumanBrainderivedneuroophicfacor)ELISAKit人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子規(guī)格：48T/96T

2，2’-雙-4，4’-二羧醋二鉀鹽 2,2'-Biinoneolinq-4,4-diccrboxylic ccid diwo7ium sclt 979-88-4  細菌總巰基含量比色法定量檢測試劑盒20次

草酸高鐵1克2～8℃  Rabbitcyclicadenosinemonophosphate,cAMPELISAKit兔環(huán)腺苷(cAMP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T