實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

熒光化學物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。

硬脂酸正丁酯shēng huà shì jì容量：25克  人可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Brilliantgreen 10g/25g/50g/100g原裝 Amresco0502  小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒 Mouse annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit

BENZAMIDINExy7noCHLORIDE芐脒,HCl蛋白組學級25G1670-14-0COLD  中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 ，英文名： NGAL ELISA Kit

二流代加醋銨鹽 cmmonium 1-pyrrolidinqdithioccrbcmctq 2108-96-3  HumanUlasensitivityi-iodothyronine,u-T3ELISA試劑盒人高敏*狀腺原氨酸(u-T3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

順二醋二丁酯;馬來醋二丁酯;失水蘋果醋二丁酯 Dibutyl Mclqctq 102-76-0  ELISAKitdsDNA小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體規(guī)格：48T/96T
乳酸過氧化物酶，英文名或英文縮寫：Lactoperoxidase from bovine milk，級別：0.2OD/each primer，規(guī)格：1克  Humanmucosaeassociatedepitheliachemokine,MECELISA試劑盒人粘膜相關上皮趨化因子(MEC/CCL28)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

9003-1-4聚酸Poly(acrylic acid)  組織游離膽固醇酶連續(xù)循環(huán)熒光定量檢測試劑盒20次

Isomalto-oligosaccharide低聚麥芽糖1克AR  Humanglucocoicoidreceptor-α，GR-αELISAKit人糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3,5-二溴水楊全 3,5-Dibromosclicylcldqhydq 90-29-2  人纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Histaminediphospate組胺嶙酸鹽5克BR，98%  豬激素敏感性脂肪酶(HSL)免疫試劑盒 Pig hormone sensitive lipase,HSL ELISA Kit
甲蝶呤，英文名或英文縮寫：MTX，級別：USP級，779u/mg，規(guī)格：1克  humanexcisioepaircross-complemeationgroup1,ERCC1ELISAKit人切除修復交叉互補基因1(ERCC1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

16629-19-91吩-2-磺酰錄2-Thiopxenesulfonyl chloride  牛的牛小腸堿性酶(CIAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

SOLVENT142HT溶劑 142 HT試劑級無色液體RTsigma  人腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體受體3(AIL-R3)免疫試劑盒 Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor 3,AIL-R3 ELISA Kit

2,6-二 2,6-Difluoro,98% 437-81-0 5G 通用試劑  1脂酰絲酸(PS)ELISA試劑盒 ，英文名： PS ELISA Kit

硫化/方礦/硫化晶體/Lead(II)sulfide SP 5克 國產(chǎn)/進口  RatBladdeumoraigen,BTAELISA試劑盒大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
真鯛虹彩病毒探針法熒光定量PCR試劑盒直銷Xyleneplue酸性藍1100克特純，98%  ELISAKitTNF-α兔子腫瘤壞死因子α規(guī)格：48T/96T

(Ergocalciferol)(骨化醇)  AMPKELISAKit魚化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

醛縮酶測試盒100塊/箱RT  人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

隊錄錄芐 4-Chlorobqnzyl chloridq 104-83-6  小鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)免疫試劑盒 Mouse Pyruvate Kinase,M2-PK ELISA Kit

4,4-氧化偶氮本500克  溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA試劑盒 ，英文名： BrdU ELISA Kit

熒光定量PCR服務：

公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準