PrimaCell™人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

RatFactor-relatedApoptosis,FASELISA試劑盒大鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  117047-07-1別名：品牌  3’-Methoxy Puerarin

小鼠組織型纖溶酶原激活因子(tPA)ELISA試劑盒 ，英文名： tPA ELISA Kit  23445-00-3當(dāng)藥醇苷規(guī)格  Swertianolin 

鴨白介素1(IL-1)ELISA檢測(cè)試劑盒DuckIerleukin1,IL-1ELISAKit 96T/48T  2469-34-3遠(yuǎn)志皂苷元  Senegenin

犬抑制素β-B(Inhbb)試劑盒 Canine inhibin beta-B,Inhbb ELISA Kit  7518-22-1楤木皂苷A說明書  Cantleyoside

英文名稱MouseBTCELISAKit小鼠BTCELISAKit規(guī)格：96T/48T  吳茱萸苷品牌  Cantleyoside
去甲斑蝥酸鈉品牌   Demethylcantharidate   組織溶酶體型酸性1酸酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

青陽參苷元B  Qingyangshengenin B   組織人體腺病毒(adenovirus)定性檢測(cè)試劑盒20

青陽參苷元A說明書  Qingyangshengenin A   組織人體腺病毒(adenovirus)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

芹菜素-7-O-槐糖苷規(guī)格  Apigenin-7-O-β-D-sophoroside    組織人體鼻病毒(rhinovirus)定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20

千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷說明書   Oroxylin A 7-O-glucuronide   組織人體鼻病毒(rhinovirus))定性檢測(cè)試劑盒20
MouseActivinA,ACV-AELISA試劑盒小鼠活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  83-49-8豬去氧膽酸   Hyodeoxycholic acid

小鼠粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC1 ELISA Kit  89412-79-3竹節(jié)香附素A說明書  Raddeanin A

小鼠內(nèi)(ET)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseendotoxin,ETELISAKit 96T/48T  517-88-4紫草素品牌  shikonin

人相關(guān)抗原7(SPAG7)試劑盒 Human sperm associated aigen 7,SPAG7 ELISA Kit  28831-65-4紫草酸規(guī)格  Lithospermic acid

RatAndrostenedione,ASDELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  118-34-3紫丁香苷  Syringin
PrimaCell™人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞試劑盒價(jià)格107912-97-0西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5規(guī)格  Sibiricose A5  英文名稱RatCTELISAKit大鼠降鈣素(CT)規(guī)格：96T/48T

107912-97-0西伯利亞遠(yuǎn)志糖A5  Sibiricose A5  英文名稱RatCTELISAKit大鼠降鈣素(CT)規(guī)格：96T/48T

107668-79-1草烏甲素說明書  Bulleyaconitine A   英文名稱RatCrossLapsELISAKit大鼠骨原交聯(lián)(CrossLaps)規(guī)格：96T/48T

107534-93-0安五脂素  Anwuligan   英文名稱RatCrossLapsELISAKit大鼠骨原交聯(lián)(CrossLaps)規(guī)格：96T/48T

107438-79-9銀杏內(nèi)酯J品牌  Ginkgolide J  英文名稱RatCRHELISAKit大鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。