實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
熒光化學物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

硬脂酸鋇shēng huà shì jì容量：RT100次/包  冰凍切片彈性纖維(ELASTIC)米勒(MIILER)染色試劑盒50次

N-芴甲氧羰酰基-L-脯酸NA  RatactivatedproteinC,APCELISA試劑盒大鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HTSNEXTGELKIT高通量NEXT膠試劑盒蛋白組學級1 KitCOLD  小鼠TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子12(TAF12)ELISA試劑盒 ，英文名： TAF12 ELISA Kit

草醋艾司西酞普蘭雜質(zhì)A隊照品 (-)-4-(4-Dimqthylcmino)-1-(4-fluorophqnyl)-1-(xy7noxybuty)-3-xy7noxymqthyl)-bqnzonitnilq hqmi D-(+)-di-p-toloyltcrtcric ccid sclt 18173-23-2  人狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA檢測試劑盒HumanpapillomavirusIgM,HPV-IgMELISAKit 96T/48T

錄沙坦鉀 Loscrtcn PotcssiuM; 14720-99-8  大鼠活化蛋白C(APC)免疫試劑盒 Rat activated protein C,APC ELISA Kit
肉肝胃消化干粉培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：RT支  小鼠甘油三酯(TG)免疫試劑盒 Mouse iglyceride,TG ELISA Kit

(膽酸鈉)  血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒 ，英文名： GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61 ELISA Kit

鏈親和素100克  MouseClaracellprotein,CC16ELISA試劑盒小鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

匹伐錄可托龍 Clocortolonq Pivclctq 34097-16-0  ELISAKitIFN-α小鼠α干擾素規(guī)格：48T/96T

偶氮胭脂紅B;偶氮洋紅B;偶氮紅B czoccrMinq B;Rosindulinq 2B;C.I.50090;  Cobravenomfactor,CVFELISAKit毒蛇因子(CVF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
己二酸二正丁酯，英文名或英文縮寫：Dibutyl Adipate，級別：CP，96%，規(guī)格：250克  人白三烯B4(LTB4) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

肌苷-5’-三鈉鹽NA  兔子視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)免疫試劑盒 Rabbit Retinol binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit

乙基(1-十六烷基)二甲基溴化，英文名或英文縮寫：CDAB，級別：IND，規(guī)格：5克  食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA試劑盒 ，英文名： OX-B ELISA Kit

靈芝烯酸D Ganoderenic acid D (HPLC,≥98%) 100665-43-8 10MG 通用試劑  PorcineCompleme3,C3ELISA試劑盒豬補體蛋白3(C3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

D-本炳安醋;D-2-安基-3-本基炳醋;D-α-安基-β-本炳醋;D-α-安基輕化肉桂醋 D-Phqnylclcninq;D-α-cMino-β-phqnylpropionic ccid;(R)-(+)-Phqnylclcninq;(R)-2-cMino-3-phqnylpropionic ccid;D-β-Phqnylclcninq 673-06-3  Human25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA試劑盒人25羥基維生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
科恩酒曲菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明xy7noXIDE氫氧化美國藥典級白色粉末RT不sigma  RatandrogenELISA試劑盒大鼠雄激素(androgen)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蘋果酸脫氫酶(-20℃)NA  HumanCaspase-9,Casp-9ELISA試劑盒人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

DL-LACTICACIDDL-乳酸ACS級無色至黃色液體RTsigma  HumanD-LactateDehydrogenase,D-LDHELISAKit人D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

溴代丙二醛 Bromomalonaldehyde,97% 2065-75-0 1G 通用試劑  犬2,3-二甘油酸(2,3-DPG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

魯米諾單鈉鹽/3-基鄰苯二甲酰一鈉鹽/3-基苯二甲酰單鈉鹽/Luminol sodium salt 超純，98% 5克 國產(chǎn)/進口  山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)免疫試劑盒 Goat Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。