人體皮膚癌組織提取物【Cancer: Human Skin Cancer Derivatives】

皮膚癌是種發(fā)生于皮膚上的惡性腫瘤之一，按病理組織學主要分為基底細胞癌、鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、特發(fā)性出血性肉瘤（Kaposi肉瘤）、汗腺癌、隆突性皮膚纖維肉瘤、血管肉瘤等，其中以基底細胞癌和鱗狀細胞癌為常見。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體皮膚癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

運輸和保存；

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

Oligo (dT) 18 Primer   0ul4,4'-Bis(α,α-dimethylbenzyl)diphenylamine08174,4'-雙(α,α-二甲基芐基)

pd(N)6 隨機六聚體引物   0ul4,4'-Bis(N-carbazolyl),1'-biphenyl5832814,4'-二(9-咔唑)

RNase Inhibitor  00U /5×00U 4,4'-Bis(diethylamino)benzophenone3四乙基米氏酮

RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit   次 4,4'-Bis(chloromethyl)biphenyl1664,4'-雙(氯甲基)

2×DNA連接緩沖液 2×ligation solution MasterMix1ul 4,4'-Bis(5-methyl-benzoxazolyl)stilbene2394,4'-雙(5-甲基-苯并惡唑基)芪
D-Lactosemonohydrate   500g  3-Amino-2,6-piperidinedione hydrochloride  24666-56-6  中文名：  分子式：C5H9ClN2O2 

DEPC   100ml                 Amorolfine hydrochloride  中文名：鹽酸阿莫洛芬  分子式：C21H36ClNO 

DeoxycholicAcid,Salt   50g  Amoxapine  14028-44-5  中文名：阿莫沙平  分子式：C17H16ClN3O 

CytochromeC,frombovinehea                    Arillatose B  中文名：  分子式：C22H30O14 

CytochalasinB,Helmihosporiumdematioideum  Aripiprazole  129722-12-9  中文名：阿立哌唑  分子式：C23H27Cl2N3O2
慶大霉素（標準品）  Gentamicin  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖0酸異構(gòu)酶1(TPI1)ELISA試劑盒 ，英文名： TPI1 ELISA Kit

利福霉素SV（標準品）  Rifamycin   質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

SL327  SL-327  質(zhì)量規(guī)格：>98%，MEK1/2抑制劑 小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA檢測試劑盒Mouseglucoprotein130,gp130ELISAKIT 96T/48T

麥迪霉素（標準品）  Midecamycin  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA試劑盒 ，英文名： gp130 ELISA Kit

妥布霉素（標準品）  Tobramycin Base  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖蛋白130(gp130/CD130)ELISA試劑盒 ，英文名： gp130/CD130 ELISA Kit

制霉素（標準品）  Nystatin  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖化白蛋白(GA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

磺芐西林（標準品）  SULBENICILLIN  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

乙酰螺旋霉素（標準品）  Acetylspiramycin  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA試劑盒 ，英文名： A1c ELISA Kit

三氯氨鉑酸鉀  Potassium trichloroammineplatinate(II)  質(zhì)量規(guī)格：>95% 小鼠糖抗原125(CA125)ELISA試劑盒 ，英文名： CA125 ELISA Kit

西索米星（標準品）  Sisomicin  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 小鼠糖類抗原125(CA125)ELISA試劑盒 ，英文名： CA125 ELISA Kit
人體皮膚癌組織提取物價格兔子白介素9(IL-9)ELISAKit     6-Chloroguanine riboside  2004/7/1  中文名：6-氯鳥嘌呤核苷  分子式：C10H12ClN5O4  度：95.0%  關(guān)鍵詞： 

兔子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISAKit     6-Fluoro-3-(4-piperidinyl)-1,2-benzisoxazole hydrochloride  84163-13-3  中文名：  分子式：C12H14ClFN2O 

兔子白介素6(IL-6)ELISAKit     6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  中文名：  分子式：C14H24O8  度：98.0%

兔子白介素4(IL-4)ELISA試劑盒     6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  19131-13-6  中文名：  分子式：C14H24O8 

兔子白介素4(IL-4)ELISAKit                 6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  中文名：  分子式：C14H24O8