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人臍帶單核細胞提取物【Human Umbilical Cord : Normal Umbilical Mononuclear Cell Derivatives】

人臍帶單核細胞提取物是從人臍帶單核細胞提取的，人臍帶單核細胞從正常人臍帶組織制備。正常人臍帶組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

實驗事項：

1. 試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時，請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請確配置標準品及工作液，盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10μl)，以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7.  底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請后乘以稀釋倍數(shù)。

抑肽酶 Aprotinin   mg/mg5-Aminoindazole1933515-氨基吲唑

脂肪酶 Lipase   5g4-Aminohippuric acid6184-氨基馬尿酸

0.1 ml EU材質薄壁八聯(lián)管1條/包3-Amino-phenylpropionic acid6149C9H11NO2

0.1 ml薄壁半裙邊96孔板(適用roche機器)塊/盒 6-Aminopenicillanic acid55166-氨基青霉烷酸

0.1ml 96孔PCR板 no skirted，flat rim(Eppendorf，MJ Research,MX000,StepOne plus)4-Amino-N-methylphthalimide24-氨基-N-甲基
Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19    人視黃醇結合蛋白4(RBP-4)ELISAKit              

Otophylloside B 4'''-O-α-L-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19    中文名稱   方法   規(guī)格

Otophylloside B  中文名：青陽參苷B  分子式：C49H78O16    兔子端粒酶(TE)ELISAKit  

Ornidazole  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3    兔子單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISAKit  

Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16    兔子促上腺皮質激素(ACTH)ELISAKit
油菜甾醇 HPLC≥98% 20mg RatIerleukin32,IL-32ELISAKit大鼠白介素32(IL-32)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

黃花菜木脂素B HPLC≥98% 20mg RatIerleukin32,IL-32ELISA試劑盒大鼠白介素32(IL-32)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N阿魏羥色胺 HPLC≥98% 20mg RatIerleukin4,IL-4ELISAKit大鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

戈米辛H HPLC≥98% 20mg RatIerleukin4,IL-4ELISA試劑盒大鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

齊墩果烯b,b二醇 HPLC≥98% 20mg RatIerleukin5,IL-5ELISAKit大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

曼陀羅萜醇酮 HPLC≥98% 20mg RatIerleukin5,IL-5ELISA試劑盒大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

羥基鐵屎米酮 HPLC≥98% 20mg RatIerleukin6,IL-6ELISAKit大鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

脫氫山楂酸 HPLC≥95% 20mg RatIerleukin6,IL-6ELISA試劑盒大鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

,,','四羥基甲氧基黃酮 HPLC≥95% 20mg RatIerleukin-7,IL-7ELISAKit大鼠白介素7(IL-7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

仙茅木酚素 HPLC≥95% 20mg RatIerleukin-7,IL-7ELISA試劑盒大鼠白介素7(IL-7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人臍帶單核細胞提取物說明書Sulfamonomethoxine   38006-08-5  中文名：磺胺間甲氧嘧啶鈉  分子式：C11H11N4NaO3S  度：98.0%      小鼠溶菌酶(LZM)ELISAKit              

Sulfamonomethoxine  1220-83-3  中文名：磺胺間甲氧嘧啶  分子式：C11H12N4O3S  度：98.0%      小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)ELISA試劑盒  

Sulfamethoxazole  723-46-6  中文名：磺胺甲噁唑  分子式：C10H11N3O3S  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒  

Sulfamethazine  57-68-1  中文名：磺胺二甲嘧啶  分子式：C12H14N4O2S  度：99.0%      小鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒  

Sulfaguanidine  57-67-0  中文名：磺胺脒  分子式：C7H10N4O2S  度：99.0%      小鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒

注意事項：

1. 接收到，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。