PrimaCell™小鼠內(nèi)臟脂肪細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

化大鼠腎上腺髓質(zhì)素(AM)基因重組表達載體(pGEFP-AM)10微克  64849-39-4甜葉懸鉤子苷說明書  Rubusoside

RatHistoneDeacetylase,HDELISA試劑盒大鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  20137-37-5鐵冬青酸品牌  Rutundicacid 

小鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)ELISA試劑盒 ，英文名： LPS ELISA Kit  191729-45-0通關(guān)藤苷H規(guī)格  Tenacissoside H

小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA檢測試劑盒Mouseα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit 96T/48T  928151-78-4通關(guān)藤苷F  Tenacissoside F

人巨噬細胞移動抑制因子(MIF)試劑盒 Human MIF ELISA Kit  191729-44-9通關(guān)藤苷I說明書  Tenacissoside I
37271-16-2番瀉苷C  Sennoside C   載玻片細胞P16蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

36948-76-2千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷  Oroxyloside   載玻片細胞P16蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

3681-99-0葛根素品牌  Puerarin   載玻片細胞NFKAPPABP65蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20

3681-99-0葛根素  Puerarin   載玻片細胞NFKAPPABP50蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20

3681-93-4牡荊素品牌  Vitexin  載玻片細胞NFKAPPABP50蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20
小鼠16α羥基雌酮1(16-αOHE-1)ELISA檢測試劑盒Mouse16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISAKit 96T/48T  518-17-2吳茱萸堿  Evodiamine

人巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)試劑盒 Human MIP-5 ELISA Kit  84-26-4吳茱萸堿說明書  Rutecarpine

Ratadvancedglycationendproducts,AGEsELISAKit大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  7432-28-2五味子醇甲品牌  Schisandrin

載玻片細胞VEGF蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  58546-54-6五味子醇乙規(guī)格  Schisandrol B

Mouse5-Hydroxyyptamine,5HTELISA試劑盒小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  61281-38-7五味子甲素  schisandrin A
PrimaCell™小鼠內(nèi)臟脂肪細胞試劑盒說明書519-02-8苦參堿規(guī)格  Matrine  植物總氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒20

518-82-1大黃素說明書  Emodin   植物總RNA化試劑盒(高多糖/酚)20

518-69-4延胡索甲素說明書  （+）- Corydaline   植物總RNA化試劑盒(低多糖/酚)20

518-69-4延胡索甲素品牌  Corydaline  植物種子甲磺酸乙脂突變誘導(dǎo)試劑盒3

518-34-3粉防己堿  Tetrandrine   植物種子活性葉綠體分離試劑盒20

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。