細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）正常大鼠腎細胞；NRK培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 正常大鼠腎細胞；NRK培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮樣

生長特性貼壁生長

特征特性該細胞源于Osborne-Mendel大鼠的正常腎組織。

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS

傳代方法1:4~1:12傳代；2~3天換液1次。

傳代情況P10

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測培養(yǎng)法（-）

STR-

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到正常大鼠腎細胞；NRK培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞(傣族);KM9403

CD59 Others Rat 大鼠 CD59 / CD59A / MAC-IP 人細胞裂解液 (陽性對照)

人子宮頸上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

Yac-1細胞，小鼠淋巴瘤細胞 PA317(成纖維細胞) 人臍靜脈內(nèi)皮細胞;HUV-EC-C

CXCL12 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標簽)

Saos-2(人骨肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人 Ephrin-A4 / EFNA4 人細胞裂解液 (陽性對照)
正常大鼠腎細胞；NRK培養(yǎng)雞促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA 試劑盒 48T/96T 試劑盒 組裝/原裝

人異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G(hNP G)免疫試劑盒 Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein G,hNP G ELISA Kit

可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 ，英文名： sCD40L ELISA Kit

RatEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISA試劑盒大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

humandihydropyrimidinase-like3,DPYSL3ELISA試劑盒人二氫嘧啶酶樣3(DPYSL3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

HumanHeatShockProtein20，HSP-20ELISAKit人熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
冷凍保存細胞之方法：
正常大鼠腎細胞；NRK培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。