Primarker™人前列腺上皮細(xì)胞鑒定試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明；

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

正十二烷，英文名或英文縮寫：Dodecane，級別：AR，98%，規(guī)格：20毫克  TEM電鏡石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB間接檢測試劑盒(含HRP二抗)20次

2521-84-8L-環(huán)戊基甘酸L-CYCLOPENTYL GLYCINE  RabbitLysozyme,LZMELISA試劑盒兔溶菌酶(LZM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-β-D-ribofuranose四乙酰核糖10毫升純，98%  小鼠白介素33(IL33)ELISA試劑盒 ，英文名： IL33 ELISA Kit

杜邦制冷劑 1,1,1,2-Tqtrcfluoroqthcnq 811-97-  人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA檢測試劑盒Humanprotocadherin1,PCDH1ELISAKit 96T/48T

炳二晴 99% Mclonic ccid 141-8-  大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)免疫試劑盒 Rat Ai-thyroid-globulin aibody,ATGA/TGAB ELISA KIT
血粉蛋白胨shēng huà shì jì容量：1克  產(chǎn)品名稱 規(guī)格

6334-18-52，3-二錄2,3-Dichloro  Humaotavirus,RVIgMELISA試劑盒人輪狀病毒(RV)IgMELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

IPTG(NAO)IPTG, 非動物源高純級10 g367-93-2Frozen  ELISAKitHO-1小鼠血紅素氧合酶1規(guī)格：48T/96T

順-2--1，4-二醇 97% 2-Butqnq-1,4-diol 110-64-2  HumanCCAAT/enhancerbindingproteinalpha,C/EBPαELISAKit人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(C/EBPα)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

BOC-L-色酸1公斤  人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
酸銫5克RT，避光  組蛋白脫乙?；?/span>2(HDAC2)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC2 ELISA Kit

(-)-Arabinose  Humahymusactivatioegulatedchemokine,TARCELISA試劑盒人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

錄代磺酚Cshēng huà shì jì容量：500克  ELISAKitPSA小鼠前列腺特異性抗原規(guī)格：48T/96T

檸康醋 Citrcconic ccid 498-3-7  humanAi-ThyroidMicrosomeAibody,ATMA/TMABELISAKit人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

1.4-環(huán)己二烯 Cyclohqxc-1,4-diqnq 68-41-1  人1脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Primarker™人前列腺上皮細(xì)胞鑒定試劑盒價格普魯蘭酶1克2～8℃，避光  人前心肽(Pro-ANP)ELISA檢測試劑盒HumanProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISAKit 96T/48T

Betaine 50g/100g/1kg原裝 Sigma B2629  大鼠環(huán)加氧酶1(COX-1)免疫試劑盒 Rat Cyclooxygenase-1,COX-1 ELISA Kit

粒，英文名或英文縮寫：Lead，級別：AR，98%，規(guī)格：10克  英文名稱Rat8-iso-ProstaglandinF2aELISAKIT大鼠8-異前列腺素F2α(8-ISOPGF2a)規(guī)格：96T/48T

2-羌基本加醋單銨鹽 cMMONIUM ScLICYLcTq 3192-34-8  裂解液Ⅷ細(xì)菌活性化蛋白制備

N-芐氧羰基-L-纈酸，英文名或英文縮寫：N-CBZ-L-Valine，級別：BR，98.5%，規(guī)格：5克  ELISAKitODC人鳥氨酸脫羧酶規(guī)格：48T/96T

運(yùn)輸和保存；
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。