人腎系膜細(xì)胞提取物【Human Kidney : Normal Renal Mesangial Cell Derivatives】

人腎系膜細(xì)胞提取物是從人腎系膜細(xì)胞提取的，人腎系膜細(xì)胞從正常人腎組織制備。正常人腎組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

新布尼亞病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Nicorandil651416尼可地爾

麻疹病毒/風(fēng)疹病毒雙重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Dronedarone hydrochloride1416253鹽酸決奈達(dá)隆

東部/西部/委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒三重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Bisoprolol fumarate43443富馬酸比索洛爾

登革熱Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ病毒四重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒484-[2-[(3-Ethyl-methyl-oxo-pyrrolin-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide11189

小反芻獸疫病毒單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Minoxidil3841米諾地爾
Nifedipine  21829-25-4  中文名：硝苯地平  分子式：C17H18N2O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒           

Nicorandil  65141-46-0  中文名：尼可地爾  分子式：C8H9N3O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠小鼠透明質(zhì)酸   英文名稱：   Mouse Hyaluronic Acid   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HA

Nicarbazin  330-95-0  中文名：尼卡巴嗪  分子式：C19H18N6O6  度：99.0%      小鼠低氧誘導(dǎo)因子1a   英文名稱：   Hypoxia Inducible Factor 1a   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HIF-1α

Nevirapine  129618-40-2  中文名：奈偉拉平  分子式：C15H14N4O  度：98.0%      小鼠熱休克蛋白60   英文名稱：   Heat shock protein 60   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Hsp-60

Neutral berberine sulfate  316-41-6  中文名：硫酸黃連素  分子式：C20H20NO8S  度：98.0%      小鼠組胺   英文名稱：   Histamine   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HIS
異銀杏雙黃酮 HPLC≥98% 20mg MAPK蛋白共沉淀分析試劑盒5

異澤蘭黃素 HPLC≥98% 20mg MAYER蘇木素復(fù)染試劑盒50

異紫花前胡內(nèi)酯 HPLC≥98% 10mg McCOY’S5A培養(yǎng)基1/10升(片劑)

異紫堇定堿 HPLC≥98% 20mg MEM培養(yǎng)基1/10升(片劑)

益母草苷 HPLC≥98% 20mg MGMT基因甲基化程度定量分析試劑盒20

薏苡素 HPLC≥98% 20mg MHCELISA試劑盒魚類主要組織相容性復(fù)合體規(guī)格：96T/48T

茵芋苷 HPLC≥98% 20mg MHPG高效液相色譜電化學(xué)定量檢測試劑盒20

茵芋堿 HPLC≥98% 20mg Michel固著液50毫升

羊藿苷I HPLC≥98% 20mg MLH1基因甲基化程度定量分析試劑盒20

羊藿素 HPLC≥98% 20mg MMLV(H點(diǎn)突變)2500U
人腎系膜細(xì)胞提取物Terbinafine hydrochloride  78628-80-5  中文名：鹽酸特比萘芬  分子式：C21H26ClN  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)ELISA試劑盒  

Terbinafine  91161-71-6  中文名：特比萘芬  分子式：C21H25N  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（CHAT）ELISA試劑盒           

Tenuifoliside A  139726-35-5  中文名：遠(yuǎn)志蔗糖酯A  分子式：C31H38O17  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  抗抑郁; 遠(yuǎn)志; 蔗糖; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠乙型肝炎e抗體(HBeAb)ELISAKit  

Tenofovir  147127-20-6  中文名：泰諾福韋  分子式：C9H14N5O4P  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISAKit  

Tenacissoside I  191729-44-9  中文名：通關(guān)藤苷I  分子式：C44H62O14  度：%  關(guān)鍵詞：  通關(guān)藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)ELISAKit

 運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。