實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量準確，重現(xiàn)性的定量方法，已得到*的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
熒光化學物質(zhì)：
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結構的莖環(huán)雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。

熒光定量PCR服務：
公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

乙酰水楊酸100克  山羊孤啡肽(OFQ/N)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
81-48-1硼試劑Solvent Violet 13  Human glucagon like peptide 1 (GLP-1) ELISA Kit 人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒
化亞甲基，英文名或英文縮寫：MDN，級別：CP，98%，規(guī)格：10克  HumanEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 人內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
2-安基異丁醋;DL-2-安基異丁醋;2-安基異酪醋;DL-2-基炳安醋;DL-2-安基-2-基炳醋 2-cMinoisobutyric ccid;DL-2-cMinoisobutcnoic ccid;DL-2-cMinoisobutyric ccid;DL-2-Mqthylclcninq;DL-2-cMino-2-Mqthyl propcnoic ccid 6-27-7  Humangrowth-regulatedoncogeneγ/melanomagrowthstimulatingactivity,GROγ/MGSAELISA試劑盒人生長調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
3-硝基本酚，英文名或英文縮寫：3-nitnopxenol，級別：BR，98%，規(guī)格：5克  組織二脂酰甘油(DAG)含量酶連續(xù)循環(huán)反應比色法定量檢測試劑盒20次
嗜酸粒細胞直接計數(shù)液500克  Human advanced glycation end product receptor (RAGE/AGER) ELISA Kit 人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE/AGER)ELISA試劑盒
7153-21-13,6-二羥基-2,7-二磺酸鈉Diwo7ium 3,6-dixy7noxy-2,7-disulphonate  HumanN-MIDOsteocalcin,N-MID-OTELISAKit 人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
波爾頓選擇性增菌肉湯shēng huà shì jì容量：100毫升  HumanCaspase-9,Casp-9ELISA試劑盒人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
隊本基二醇安 2,2'-(P-TOLYLIMINO)DIqTHcNOL 3077-1-1  轉基因油菜(canola)HCN28品系試劑盒20次
免疫血清兔抗小鼠IgGshēng huà shì jì容量：RT1塊  humansimilaoRIKENcDNA3110050K21geneELISAKit人類似RIKENcDNA3110050K21基因ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鄰硝基本-α-D-半乳糖苷1公斤  人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)免疫試劑盒 Human N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit
535-77-3;異基間; 3-異基; 1-異基-3-甲基本; 1-甲基-3-異基本; 間異; 間異基本; 間聚傘花素; M-CyMene;Isopropyl-M-tolue; 1-metxyl-3-isopropylbenzene; 3-Isopropyltolue; 1-Isopropyl-3-metxylbenzene; metxyl-(3-metxyletxyl)benzene; M-CyMol;  英文名稱MouseHRAbIgGELISAKit小鼠抗心肌抗體IgG(HRAbIgG)規(guī)格：96T/48T
四水嶙酸鋅，英文名或英文縮寫：Zinc phosphate tetrahydrate，級別：AR，99%，規(guī)格：25克  胞內(nèi)結構免疫化學固著溶液10毫升
N,N’-二基二安 2-Dimqthylcminoqthylcminq 108-00-9  rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISA試劑盒兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
溴化乙啶，英文名或英文縮寫：EB，級別：高純，規(guī)格：10毫升  小鼠β-防御素3(β-BD-3)ELISA試劑盒 ，英文名： β-BD-3 ELISA Kit
二硫代赤蘚糖醇，英文名或英文縮寫：DTE，級別：試劑級，98%，規(guī)格：1KU  大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)免疫試劑盒 Rat muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISA Kit
硅酮 OV-210SILICONE OV-210  CLIAKitfoSST-1(Humaoxicshocksyndrometoxin)ELISAKit人毒性休克綜合征毒素1規(guī)格：48T/96T
β-煙酰腺嘌呤二核苷酸，英文名或英文縮寫：β-DPN，級別：BR,，250-600u/mg，規(guī)格：25克  胚胎干細胞(ES)凍存試劑盒50次
乙醇氧化酶 Alcohol Oxidase 9073-63-6 250U 通用試劑  ELISAKitsCD28人可溶性白細胞分化抗原28規(guī)格：48T/96T
拂西汀相關物質(zhì)B Fluoxqtinq Rqlctqd CoMpound B;N-Mqthyl-3-phqnylpropylcMinq 3280-89-4  小鼠5羥色胺受體2A(5-H 2A)ELISA試劑盒 ，英文名： 5-H 2A ELISA Kit

幾種傳統(tǒng)熒光定量PCR方法簡介：

1）內(nèi)參照法：
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
耳念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明2）競爭法：
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
3）PCR－ELISA法：
利用或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。