PrimaCell™大鼠小腸平滑肌細胞試劑盒

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

實驗要點及說明；

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點；

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

小鼠著絲粒蛋白H(CENPH)ELISA試劑盒 ，英文名： CENPH ELISA Kit  異連翹苷規(guī)格  Isoforsythiaside

血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3)ELISA檢測試劑盒MonkeyVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3ELISAkit 96T/48T  6817-41-0異蓮心堿  Isoliensinine

犬繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)試劑盒 Canine Mullerian Inhibiting Substance/Ai-Mullerian Hormone,MIS/AMH ELISA Kit  2450-53-5異綠原酸A說明書  Isochlorogenic acid A

英文名稱HumanniicoxidesyhaseELISAKIT人合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  14534-61-3異綠原酸B品牌  Isochlorogenic acid B

化微粒體1脂酶D(PhospholipaseD)總活性熒光定量檢測試劑盒20  32451-88-0異綠原酸C規(guī)格  Isochlorogenic acid C
27215-14-1新穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格  Neoandrographolide    英文名稱Ratt-PAELISAKit大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)規(guī)格：96T/48T

27215-14-1新穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格  Neoandrographolide   英文名稱Ratt-PAELISAKit大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)規(guī)格：96T/48T

27210-57-7新丹參酮  miltirone  英文名稱RattotalhemolyticcomplemeELISAKit大鼠總?cè)苎a體(CH50)規(guī)格：96T/48T

27210-57-7丹參新酮說明書  Miltirone   英文名稱RattotalhemolyticcomplemeELISAKit大鼠總?cè)苎a體(CH50)規(guī)格：96T/48T

27208-80-6虎杖苷品牌  Polydatin   英文名稱RatTissuePolypeptideAigenELISAKit大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISAKit規(guī)格：96T/48T
小鼠載脂蛋白H(APOH)ELISA試劑盒 ，英文名： APOH ELISA Kit  28831-65-4紫草酸規(guī)格  lithospermic acid

猴可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA檢測試劑盒Monkeysolublevasccularcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit 96T/48T  81907-62-2靈芝酸A  Ganoderic Acid A

犬結(jié)締組織生長因子(CTGF)試劑盒 Canine connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit  33783-82-3HederacolchisideE說明書  Hederacolchiside E

英文名稱HumahrombomodulinELISAKit人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  68027-15-64補充中2品牌  hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside

化線粒體凍存液(酶學和膜結(jié)構(gòu)保護)50毫升  848784-87-24補充中3規(guī)格  Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[ D-glucopyranosyl(1→4)[ L-rhamnopyranosyl) (1→2)-L-arabinopyranosyl]oxy], (3,4)-)
PrimaCell™大鼠小腸平滑肌細胞試劑盒價格57-87-4甾醇  Ergosterol   豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒 Porcine IGFBP-3 ELISA Kit

578-74-5芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷品牌  Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside   豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA檢測試劑盒Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit 96T/48T

57817-89-7甜菊苷  Stevioside  豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)試劑盒 Pig insulin-like growth factors binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit

574-84-5秦皮素  Fraxetin  豬胰島素樣生長因子2(IGF-2)試劑盒 Porcine insulin-like growth factors 2,IGF-2 ELISA Kit

57420-46-9胡麻屬苷品牌  Sesamoside   豬胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA檢測試劑盒Porcineinsulin-likegrowthfactors2,IGF-2ELISAKit 96T/48T

運輸和保存；
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。