冷凍保存細(xì)胞之方法：
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-A4培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱 小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-A4培養(yǎng)
形態(tài)特性克隆樣

生長特性貼壁生長

特征特性裸鼠移植實(shí)驗(yàn)證明可向三個胚層分化。

培養(yǎng)條件KO-DMEM+15%FBS+103U/mlLIF+2mML-Glu+1%NEAA+0.1Mβ-Mer

傳代方法1:10傳代；3~4天傳代一次

傳代情況

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測培養(yǎng)法（-）

STR-

同工酶

染色體

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-A4培養(yǎng)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶拿到小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-A4培養(yǎng)后，應(yīng)該注意什么？
客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*Anti-Phospho-PIM1（Tyr218）/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化前病毒整合位點(diǎn)蛋白1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Pin1/FITC熒光素標(biāo)記肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Pin1(Ser16)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-PNK1/PNKP/FITC熒光素標(biāo)記多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-PNK1(Ser114/Thr118)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-PIRH2/FITC熒光素標(biāo)記泛素連接酶抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-SIAH1/FITC熒光素標(biāo)記泛素連接酶Siah1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-SIAH2/FITC熒光素標(biāo)記泛素連接酶Siah2抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-PIWIL1/FITC熒光素標(biāo)記piwi樣1蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-PKA/FITC熒光素標(biāo)記蛋白激酶A抗體IgG規(guī)格：0.2ml
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞；PUMC-mips-A4培養(yǎng)*Anti-GRM5/FITC熒光素標(biāo)記代謝型谷氨酸受體5抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GRP/FITC熒光素標(biāo)記促胃泌素釋放肽抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GRP75/FITC熒光素標(biāo)記G蛋白偶聯(lián)受體75抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GRP78/FITC熒光素標(biāo)記葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GRP94(gp96)/FITC熒光素標(biāo)記葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GsaR/FITC熒光素標(biāo)記促胃泌素受體抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GSK-3Alpha/FITC熒光素標(biāo)記葡萄糖合成激酶-3α抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-Phospho-Glycogensynthase1(Ser641)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化葡萄糖合成酶1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-phospho-GSK3Alpha/Beta(alpha+beta)(phosphoTyr279+Tyr216)/FITC熒光素標(biāo)記磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-GSK-3Beta/FITC熒光素標(biāo)記糖原合酶激酶-3β抗體IgG規(guī)格：0.2ml
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