人角膜上皮細胞提取物【Human Eye: Normal Corneal Epithelial Cells Derivatives】

人角膜上皮細胞提取物是從人原代角膜上皮細胞提取的，人原代角膜上皮細胞從正常人角膜上皮組織制備。正常人角膜上皮組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析，保證了產品的質量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。 

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

 運輸和保存：

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

樹脂型™基因組DNA提純試劑盒0次5-O-Ethylcleroindicin D4881382

樹脂型™PCR產物純化及膠回收試劑盒0次5-Hydroxymethyl-furoic acid633815-羥甲基-糠酸

硅膠膜型™質粒DNA小量提取試劑盒次(2Z,6Z,E,14E,18E)-Farnesylfarnesol6953

硅膠膜型™基因組DNA提純試劑盒次Solanesol1317茄尼醇

硅膠膜型™PCR產物純化及膠回收試劑盒次Methyl (9Z,11E)3-hydroxyoctadeca,11-dienoate98375
N-Acetyl-D-tryptophan  2280/1/5  中文名：N-乙酰基-D-色氨酸  分子式：C13H14N2O3    三0酸腺苷酶   英文名稱：   Adenosine iphosphate   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ATP

Allyl cinnamate  1866-31-5  中文名：肉桂酸烯丙酯  分子式：C12H12O2    緊張素Ⅱ一型受體抗原   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AT1R

2-Aminofluorene  153-78-6  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N    抗緊張素‖受體︱型自身抗體   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AT1R-AA

(1R,2S)-1-Amino-2-indanol  136030-00-7  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO    緊張素Ⅰ   英文名稱：   AngiotensinⅠ   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANGⅠ

Amitraz  33089-61-1  中文名：雙甲瞇  分子式：C19H23N3    三(羥甲基)基鹽酸鹽   100g
乙酸銨(分子生物學級)  Ammonium acetate  質量規(guī)格：>98%,分子生物學級 單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA檢測試劑盒Monkeymonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP1/MCAFELISAkit 96T/48T

微晶纖維素(100 um)  Cellulose, Microcrystalline  質量規(guī)格：BR,100 um 單核細胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20

乳糖；α-乳糖,一水  alpha-Lactose, monohydrate  質量規(guī)格：BR 單酸甘油脂脂解酶(monoacylglycerollipase)活性比色法定量檢測試劑盒20

氯化鈣二水  Calcium chloride, dihydrate  質量規(guī)格：>99%,BR 單線態(tài)氧氣清除(scavenging)活性比色法篩選試劑盒20

乙二醇  Ethylene glycol  質量規(guī)格：BR 單線態(tài)氧氣清除(scavenging)活性熒光篩選試劑盒20

硫酸鎂七水(分子生物學級)  Magnesium sulfate, heptahydrate  質量規(guī)格：>98%,分子生物 膽轉運功能檢測試劑盒20

糖化酶;葡萄糖淀粉酶  Glucozyme  質量規(guī)格：BR,10萬u/G 膽紅素(Bilirubin)定量檢測試劑盒50

聚乙二醇4000  PEG 4000  質量規(guī)格：>99%,BR 膽堿酯酶(CHE)定量檢測試劑盒50

無水氫二鉀  Potassium phosphate, dibasic, anhydrous  質量規(guī)格：>98%,BR 膽堿酯酶(CHE)活性比色法定量檢測試劑盒20

甲酰胺  Formamide  質量規(guī)格：>99%,BR 淡綠(LIGHTGREEN)復染試劑盒50
人角膜上皮細胞提取物說明書trans-4-Aminocyclohexanol  27489-62-9  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠過氧化物酶體增殖物活化受體γ   英文名稱：   Mouse Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PPARγ

Tranexamic acid  1197-18-8  中文名：凝血酸  分子式：C8H15NO2  度：98.0%      小鼠誘導型合成酶elisa試劑盒   小鼠誘導型合成酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠誘導型合成酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠誘導型合成酶試劑盒、小鼠誘導型合成酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠內皮型合成酶elisa試劑盒   小鼠內皮型合成酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠內皮型合成酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠內皮型合成酶試劑盒、小鼠內皮型合成酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Topiramate  97240-79-4  中文名：托吡酯  分子式：C12H21NO8S  度：98.0%  關鍵詞：    豚鼠神經肽Belisa試劑盒   豚鼠神經肽B試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豚鼠神經肽B試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豚鼠神經肽B試劑盒、豚鼠神經肽Beisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Tolvaptan  150683-30-0  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠游離脂肪酸elisa試劑盒   小鼠游離脂肪酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠游離脂肪酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠游離脂肪酸試劑盒、小鼠游離脂肪酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。