細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人胰腺導管癌細胞；CFPAC-1培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人胰腺導管癌細胞；CFPAC-1培養(yǎng)
形態(tài)特性上皮細胞

生長特性貼壁生長

特征特性CFPAC-1是胰腺管腺癌細胞系，建自26歲白人男性囊性纖維變性（CF）的肝轉移灶。該細胞系表達囊性纖維變性跨膜調節(jié)因子（CFTR）。

態(tài)為上皮樣且頂端微絨毛極化。該細胞表達胰腺管細胞特征性的細胞角蛋白和癌胚抗原。倍增時間為30-32小時。它是亞3倍體的細胞系，36％的細胞的染色體模式數(shù)為75。該細胞傳代至24代時在無胸腺小鼠中致瘤。

培養(yǎng)條件IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium優(yōu)質胎牛血清，10%

傳代方法消化3-5分鐘。1:2。4-5天長滿。

傳代情況P(20+5)

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STRAmelogenin:X,Y；CSF1PO:10；D13S317:12；D16S539:9,11；D18S51:12；D19S433:13,15；D21S11:30,31.2；D2S1338:18,23；D3S1358:16；D5S818:10,11；D7S820:8,10；D8S1179:11,15；FGA:21,22；TH01:8；TPOX:8；vWA:17

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人胰腺導管癌細胞；CFPAC-1培養(yǎng)后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*VTGELISAKit鯉魚卵黃蛋白原規(guī)格：96T

*GnRHELISAKit魚類促性腺激素釋放激素規(guī)格：48T

*FishTri-iodothyronine,T3ELISAKit魚類*狀腺原氨酸規(guī)格：48T

*FishCortisolELISAKit魚類皮質醇規(guī)格：48T

*FishhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit魚類超敏C反應蛋白規(guī)格：48T

*FishOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAkit魚骨鈣素/骨谷氨酸蛋白規(guī)格：48T

*Cheraxquadricarinatuslipovitellin/vitellin,Lv/VnELISAKit紅螯光殼螯蝦卵黃脂磷蛋白/卵黃磷蛋白規(guī)格：48T

*MacrobrachiumrosenbergiiNodavirus,MrNVELISAKit羅氏沼蝦諾達病毒規(guī)格：48T

*Cobravenomfactor,CVFELISAKit毒蛇因子規(guī)格：48T

*bullfroggrowthhormone,GHELISAKit牛蛙生長激素規(guī)格：48T
人胰腺導管癌細胞；CFPAC-1培養(yǎng)*Anti-MMP-9基質金屬蛋白酶-9抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-13基質金屬蛋白酶13抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-14基質金屬蛋白酶-14抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-15基質金屬蛋白酶-15抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-16基質金屬蛋白酶-16抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-20基質金屬蛋白酶20抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-MMP-17基質金屬蛋白酶-17抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MMP-24基質金屬蛋白酶-24抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MMP-26基質金屬蛋白酶-26抗體規(guī)格：0.2ml

*Anti-MMP-10基質金屬蛋白酶-10抗體規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細胞之方法：
人胰腺導管癌細胞；CFPAC-1培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。