細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）人急性早幼粒細胞白血病細胞；HL-60說明書準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 人急性早幼粒細胞白血病細胞；HL-60說明書
形態(tài)特性髓樣

生長特性懸浮

特征特性該細胞含有myc+致癌基因，受體表達：補體Fc；致瘤性：陽性。

培養(yǎng)條件IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium20%FBS

傳代方法每2-3天換液一次，細胞接種密度為1E+05/ml,不要超過1E+06/ml。

傳代情況完成目錄中顯示細胞污染廢棄

凍存條件

支原體檢測

STR

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到人急性早幼粒細胞白血病細胞；HL-60說明書后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
*TAb(MouseThyroxineantibody)ELISAKit小鼠甲狀腺素抗體規(guī)格：48T

*TRAb(Mousethyroidstimulatinghormonereceptorantidoby)ELISAKit小鼠抗促甲狀腺素受體抗體規(guī)格：48T

*CA(Mousecatecholamine)ELISAKit小鼠兒茶酚胺規(guī)格：48T

*IL-27(MouseInterleukin27)ELISAKit小鼠白介素27規(guī)格：48T

*IL-23(MouseInterleukin23)ELISAKit小鼠白介素23規(guī)格：48T

*CT-1(Mousecardiotrophln1)ELISAKit小鼠心肌營養(yǎng)素1規(guī)格：48T

*Alpha-FodrinIgG/IgA(Mouseanti-alpha-FodrinIgG/IgA)ELISAKit小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA規(guī)格：48T

*AT-III(MouseAnti-ThrombinIII)ELISAKit小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體規(guī)格：48T

*NP-Y(MouseneuropeptideY)ELISAKit小鼠神經(jīng)肽Y規(guī)格：48T

*GHRP(MouseGrowthHormoneReleasingPeptide)ELISAKit小鼠生長激素釋放多肽規(guī)格：48T
人急性早幼粒細胞白血病細胞；HL-60說明書*Anti-Phospho-Lyn(Tyr396)磷酸化膜相關蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-Lyn(Tyr497)磷酸化膜相關蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-LYVE-1淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-M2-PK/PKM2丙酮酸激酶-M2抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-Phospho-PKM2(Tyr105)磷酸化丙酮酸激酶M2抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-M2-PK(pyruvateKinaseM2)丙酮酸激酶-M2規(guī)格：0.1ml

*anti-IntegrinalphaE2整合素alphaE2抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-IntegrinalphaL/CD11a整合素αL抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-CD11b/CD49d整合素αM/巨噬細胞表面分子抗體規(guī)格：0.1ml

*Anti-IntegrinAlphaX/CD11c整合素αX抗體規(guī)格：0.1ml
冷凍保存細胞之方法：
人急性早幼粒細胞白血病細胞；HL-60說明書冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。