冷凍保存細(xì)胞之方法：
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H23說(shuō)明書(shū)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品描述：
細(xì)胞名稱(chēng) 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H23說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性上皮樣

生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)

特征特性該細(xì)胞源于一位51歲患有非小細(xì)胞肺癌黑人男性患者的治療前的腫瘤組織，表達(dá)C-myc、L-myc、v-src、v-abl、v-erbB、c-raf1、Ha-ras、Ki-ras、N-rasRNAs；該細(xì)胞攜帶K-ras12突變；p53基因246位密碼子突變ATC→ATG；表達(dá)PDGFA和B鏈的異源mRNA；表達(dá)TGFα、TGFβ和EGFR；角蛋白5、8和18陽(yáng)性，波

蛋白陽(yáng)性，神經(jīng)絲蛋白陰性，左旋多巴脫氫酶陰性；據(jù)報(bào)道，在軟瓊脂中該細(xì)胞

成克隆的效率為9.7%。

培養(yǎng)條件RPMI1640(w/oHepes)10%FBS；4.5g/LGlucose＋10mMHepes＋1mM丙酮酸鈉

傳代方法1:3傳代；3~4天1次。

傳代情況

凍存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

支原體檢測(cè)培養(yǎng)法（-）

STR

同工酶

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H23說(shuō)明書(shū)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項(xiàng)：
?1.一般客戶(hù)拿到人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H23說(shuō)明書(shū)后，應(yīng)該注意什么？
客戶(hù)收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；收到細(xì)胞未開(kāi)封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。
收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶(hù)造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
IgG*人免疫球蛋白G規(guī)格48T/96T

Fcγ*人免疫球蛋白GFc片段規(guī)格48T/96T

FcγRⅢ/CD16*人免疫球蛋白GFc段受體Ⅲ規(guī)格48T/96T

FcγRⅡ/CD32*人免疫球蛋白GFc段受體Ⅱ規(guī)格48T/96T

FcγRⅠ/CD64*人免疫球蛋白GFc段受體Ⅰ規(guī)格48T/96T

IgE*人免疫球蛋白E規(guī)格48T/96T

FcεRⅡ/CD23*人免疫球蛋白EFc段受體Ⅱ規(guī)格48T/96T

FcεRⅠ*人免疫球蛋白EFc段受體Ⅰ規(guī)格48T/96T

IgA*人免疫球蛋白A規(guī)格48T/96T

FcαRⅠ/CD89*人免疫球蛋白AFc段受體Ⅰ規(guī)格48T/96T
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H23說(shuō)明書(shū)SubstancePReceptor(Neurokininreceptor1;Tachykininreceptor1)P物質(zhì)受體（抗原）0.5mgSubstancePReceptor(Neurokininreceptor1;Tachykininreceptor1

SUMO類(lèi)泛素蛋白SUMO類(lèi)泛素蛋白0.5mgSUMO類(lèi)泛素蛋白

Survivin細(xì)胞凋亡抑制因子的一種（抗原）0.5mgSurvivin細(xì)胞凋亡抑制因子的一種（抗原

sVEGFR2可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2sVEGFR2可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體20.5mgsVEGFR2可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2

SYK(Spleentyrosinekinase)非受體型酪氨酸激酶(抗原)0.5mgSYK(Spleentyrosinekinase

SYVN1(synovialapoptosisinhibitor1)滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1（抗體）0.5mgSYVN1(synovialapoptosisinhibitor1

TBeta10peptide胸腺素β10抗原TBeta10peptide胸腺素β10抗原0.5mlTBeta10peptide胸腺素β10抗原

T4-BSA甲狀腺素T4偶聯(lián)牛血清白蛋白T4-BSA甲狀腺素T4偶聯(lián)牛血清白蛋白1mgT4-BSA甲狀腺素T4偶聯(lián)牛血清白蛋白
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