家豬皮膚來源細(xì)胞操作步驟：
在完成細(xì)胞分離后，接下來的關(guān)鍵步驟是細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代。首先，將分離得到的細(xì)胞懸液以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液，用預(yù)熱的培養(yǎng)基（如DMEM/F12，含10%胎牛血清和1%雙抗）重懸細(xì)胞沉淀。隨后，將細(xì)胞懸液均勻接種于預(yù)先用0.1%明膠包被的培養(yǎng)皿中，置于37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
24小時后，需在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞貼壁情況。若貼壁良好，可更換新鮮培養(yǎng)基以去除未貼壁的死亡細(xì)胞；若貼壁率較低，需檢查消化時間或培養(yǎng)基成分是否適宜。此后每2-3天更換一次培養(yǎng)基，直至細(xì)胞融合度達(dá)到80%-90%。
傳代時，用PBS輕柔洗滌細(xì)胞2次，加入0.25%EDTA消化液覆蓋細(xì)胞層，37℃孵育1-2分鐘。鏡下觀察到細(xì)胞間隙增大、形態(tài)變圓后，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，吹打形成單細(xì)胞懸液。按1:2或1:3比例分瓶傳代，并記錄代次。
為維持細(xì)胞特性，建議定期進(jìn)行支原體檢測和核型分析。對于后續(xù)實驗（如基因編輯或誘導(dǎo)分化），需在細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定（通常3-5代內(nèi)）時開展，以確保實驗結(jié)果的可靠性。 |
