鼠抗人Bcl-X單克隆抗體操作步驟:
1 . 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導(dǎo)致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer (增強(qiáng)子),在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer (酶標(biāo)二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
(注: HRP Polymer 對光敏感,應(yīng)避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。 13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen ),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。) 14 .自來水充分沖洗,復(fù)染 ,脫水,透明,封片。 MGC80-3(人胃癌細(xì)胞) MLTC-1(小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞) Molt-4(人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞) MRC-5(人胚肺成纖維細(xì)胞 ) MS1(小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞) MSTO-211H(人肺癌細(xì)胞) NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞) NCI-H1299(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) NCI-H1650(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) NCI-H292(人肺癌細(xì)胞) Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞) NCI-N87(人胃癌細(xì)胞) NG108-15(小鼠神經(jīng)細(xì)胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細(xì)胞) NIH/3T3(小鼠胚胎細(xì)胞) NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞) NRK(大鼠腎細(xì)胞) NRK-52E(大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞) OK(負(fù)鼠腎小管細(xì)胞) OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞) OS-RC-2(人腎癌細(xì)胞) OVCAR-3(人卵巢癌細(xì)胞) P19(小鼠畸胎瘤細(xì)胞) P388D1(小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞)
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