腫瘤干細(xì)胞鑒定 1．一般生物學(xué)特征鑒定主要通過觀察腫瘤干細(xì)胞的形態(tài)和生長特征以及通過核型分打鑒定腫瘤干細(xì)胞。形態(tài)多為圓形，大小不一。倍增時(shí)間較短，細(xì)胞生長密度增加，細(xì)胞核岔裂指數(shù)較高，并且具有無限增殖能力，細(xì)胞侵襲能力較強(qiáng)等特征。大部分腫瘤干細(xì)胞處于G0期。 2．體外克隆形成能力或腫瘤球形成能力鑒定 (1)克隆形成試驗(yàn)：將分選的陰性和陽性細(xì)胞分別以低濃度接種到96孔培養(yǎng)板，每孔1種100～200個(gè)細(xì)胞，大約7d后觀察其各自克隆形成情況。 (2)集落形成試驗(yàn)：白血病干細(xì)胞可進(jìn)行集落形成試驗(yàn)，將分離的陰性和陽性細(xì)胞分別1種到合適的集落培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，一般14 d后觀察集落(>20個(gè)細(xì)胞)形成數(shù)量。白血病干細(xì)胞能夠形成小的分散的集落，并且很少發(fā)生紅系細(xì)胞分化。 (3)實(shí)體瘤干細(xì)胞的腫瘤球形成試驗(yàn)：將分離得到的腫瘤干細(xì)胞重懸于合適的培養(yǎng)液中，進(jìn)行倍比稀釋，并接種到96孔培養(yǎng)板，zui終細(xì)胞稀釋的范圍從200個(gè)／孔到1個(gè)／孔。培養(yǎng)7d后，計(jì)算腫瘤球形成的總數(shù)目以及腫瘤球形成占接種細(xì)胞的比例。腫瘤干細(xì)胞形成腫瘤球能力更強(qiáng)，得到腫瘤球的比例也增高。 3．分化能力鑒定 (1)體外分化能力的鑒定：常采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、流式細(xì)胞儀分析以及RT—PCR等方法進(jìn)行鑒定。 (2)體內(nèi)移植試驗(yàn)：將腫瘤干細(xì)胞注射到有嚴(yán)重免疫缺陷的實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)，如一次性注射100、200、500或1000個(gè)細(xì)胞，然后觀察其體內(nèi)成瘤的情況。檢測分化出不同成熟細(xì)胞的能力。將腫瘤干細(xì)胞移植到NOD／SCID鼠內(nèi)，細(xì)胞可以在受體鼠內(nèi)連續(xù)傳代，分離出的腫瘤干細(xì)胞二次移植時(shí)仍能產(chǎn)生具有異質(zhì)性癌細(xì)胞的腫瘤，并可多次重復(fù)，得到的腫瘤與原代腫瘤一致。 4．腫瘤干細(xì)胞相關(guān)分子表達(dá)的檢測 腫瘤干細(xì)胞也能檢測到與干細(xì)胞自我更新和分化相關(guān)的基因表達(dá)。例如，腦腫瘤干細(xì)胞除了表達(dá)CDl33，還具有SOX一2、musashi一1、Bmi一l等神經(jīng)干細(xì)胞和其他干細(xì)胞的基因特征。 |
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