一、基本概念 從機(jī)體取材后的培養(yǎng)，只要供體均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定，此原代培養(yǎng)細(xì)胞可不用鑒定。細(xì)胞離體培養(yǎng)經(jīng)過(guò)*次傳代后具有增殖能力的細(xì)胞群體稱細(xì)胞系(cell line)；用選擇法或克隆化培養(yǎng)法從原代細(xì)胞或細(xì)胞系中獲得的具有特殊遺傳性、生化性質(zhì)或特異標(biāo)記的細(xì)胞系稱為細(xì)胞株(cell strain)。一般將原代或傳2～3代后的培養(yǎng)細(xì)胞大量?jī)龃孀鳛樵N(stock cell)，取一管細(xì)胞進(jìn)行傳代繁殖，收子代培養(yǎng)物再凍存，這樣可長(zhǎng)期使用和延緩衰老。 來(lái)源于動(dòng)物或人的正常組織細(xì)胞已建立了許多細(xì)胞系。所建立的細(xì)胞系來(lái)源包括胚胎組織和成年組織、正常組織和腫瘤組織，建成的細(xì)胞系包括上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等。許多正常細(xì)胞在體外培養(yǎng)有一定壽命，只能有限期的傳代，稱為有限細(xì)胞系或株(finite cell line or strain)，大多數(shù)二倍體細(xì)胞為有限細(xì)胞系；僅少數(shù)在體內(nèi)自身更新能力強(qiáng)的上皮細(xì)胞通過(guò)改進(jìn)培養(yǎng)技術(shù)使其具有無(wú)限增殖能力，有可能成為*性細(xì)胞系或株(continuous cell line or strain)；腫瘤來(lái)源的細(xì)胞都具有不死性，都屬于*性細(xì)胞系或株。當(dāng)細(xì)胞在體外培養(yǎng)并已連續(xù)傳代19次左右，可按建細(xì)胞系或株的要求進(jìn)行檢測(cè)或鑒定。為防止丟失(死亡斷代)或污染．在兩個(gè)以上實(shí)驗(yàn)室平行傳代和保管。細(xì)胞系的鑒定包括細(xì)胞形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)、酶學(xué)和細(xì)胞分子生物學(xué)等幾方面，鑒定的目的是使細(xì)胞系具有應(yīng)用價(jià)值。 二、建立細(xì)胞系(株)的檔案 建立細(xì)胞系或細(xì)胞株應(yīng)對(duì)如下幾方面加以說(shuō)明： (一)培養(yǎng)細(xì)胞的來(lái)源 對(duì)擬建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株，應(yīng)說(shuō)明其細(xì)胞供體所屬物種及供體的年齡、性別、取材器官或組織。如是腫瘤組織，應(yīng)說(shuō)明臨床病理診斷結(jié)果、組織來(lái)源和病歷號(hào)等信息。 (二)細(xì)胞的生物學(xué)特性 對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞生物學(xué)性狀，如細(xì)胞的一般形態(tài)、特征性結(jié)構(gòu)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和分裂指數(shù)、倍增時(shí)間、集落形成率或貼壁率等應(yīng)予以說(shuō)明，有關(guān)該細(xì)胞系的特異性狀也應(yīng)加以說(shuō)明。 (三)培養(yǎng)條件和方法 建立細(xì)胞系或細(xì)胞株時(shí)，應(yīng)說(shuō)明所使用的培養(yǎng)基、血清、使用濃度，并說(shuō)明細(xì)胞生存的適宜溫度、pH值、CO2條件等。有些細(xì)胞還需要添加一定的特定成分，應(yīng)對(duì)該成分的濃度、添加方法等予以說(shuō)明。 三、細(xì)胞系鑒定的內(nèi)容 (一)鑒定細(xì)胞系純度 鑒定細(xì)胞系的純度包括鑒定除主類細(xì)胞外，還混有哪類細(xì)胞及其所占比例多少。 (二)細(xì)胞系的穩(wěn)定性 即指在細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中主要指標(biāo)有無(wú)明顯變異。使用穩(wěn)定的細(xì)胞系才能保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。 (三)細(xì)胞學(xué)特征 需要鑒定細(xì)胞系的形態(tài)和表達(dá)特征的基本數(shù)據(jù)及其與來(lái)源細(xì)胞的差異。 (四)微生物污染檢查 需要鑒定有無(wú)病毒、細(xì)菌、真菌、支原體等污染。 (五)染色特穩(wěn)定性 包括鑒定染色體數(shù)、染色體分組、染色體分帶以及有無(wú)標(biāo)記染色體等內(nèi)容的鑒定。 (六)有元細(xì)胞系(株)交叉污染 通過(guò)同工酶譜和抗原抗體反應(yīng)等鑒定細(xì)胞系(株)的細(xì)胞特異性。 |
會(huì)員_a.png)