人巨噬細(xì)胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離，但操作煩瑣，得量不多。許多實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行基礎(chǔ)或配合臨床研究巨噬細(xì)胞功能及其與疾病的關(guān)系、或篩檢免疫增強(qiáng)藥物和探討其作用機(jī)制時(shí)，常選用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象。 (一)鼠腹腔巨噬細(xì)胞制備 1．用無(wú)菌注射器吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。 2．四日后，注射羊紅細(xì)胞(1％懸液)lml于小鼠腹腔內(nèi)。 3．注射1h后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml預(yù)溫的PBS，同時(shí)用手反復(fù)揉搓腹腔約1～2min，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細(xì)胞 4．用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。 5．用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。 (二)炭粒廓清試驗(yàn) 正常小鼠肝中庫(kù)普弗細(xì)胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10％炭粒，據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時(shí)間反復(fù)取靜脈血。測(cè)定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細(xì)胞的功能。 (三)吞噬功能的檢測(cè) 1．雞紅細(xì)胞(CRBC)懸液的制備取雞血l～2ml，阿氏液抗凝。試驗(yàn)前用無(wú)菌生理鹽水沖洗3次，然后配成5％CRBC懸液。 2．吞噬試驗(yàn)取皮皰滲出液O．5ml，加上述CRBC懸液0．01 ml混勻，置37℃水浴中30min，每隔10min輕輕搖動(dòng)1次。1000r／mln離心5min，棄上清液。留少許液體將細(xì)胞充分混勻．涂片，甲醇固定，吉姆薩染色，油鏡下觀察并計(jì)數(shù)100～200個(gè)巨噬細(xì)胞。 3．結(jié)果觀察 (1)吞噬細(xì)胞百分率：即100個(gè)巨噬細(xì)胞中吞噬有CRBC的細(xì)胞數(shù)。 (2)吞噬指數(shù)：將100個(gè)巨噬細(xì)胞所吞噬的CRBC的總和除以100，所得每個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬CRBC的平均數(shù)，即吞噬指數(shù)。 |
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