在什么情況下使用Triton-X100 （1）Triton X-100化學(xué)名稱為聚乙二醇辛基苯基醚，是一種去污劑。在免疫組織化學(xué)（>10um厚切片） 和免疫細(xì)胞化學(xué)中一般用Triton X-100 作為細(xì)胞通透劑，在膜上打孔。 （2）其作用原理：Triton X-100 可以溶解細(xì)胞膜、細(xì)胞核膜、細(xì)胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進(jìn)入胞漿和胞核內(nèi)，故在細(xì)胞免疫組化時(shí)尤為推薦使用，這樣抗體就能順利進(jìn)入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。 （3）Triton X-100既是一種表面活性劑，也有抗氧化作用。 封閉血清的選擇原則是什么？ （1）膜上或切片上有剩余的位點(diǎn)可以非特異性吸附抗體，造成后續(xù)結(jié)果的假陽(yáng)性！ （2）封閉血清一般是和二抗同一來(lái)源的，血清中動(dòng)物自身的抗體，預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合，否則在后面的步驟中如果和二抗發(fā)生結(jié)合，會(huì)造成背景。 （3）也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能與一抗來(lái)源一致。 抗體孵育條件的比較？ （1）一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫、37度，其中4度效果*；孵育時(shí)間：這與溫度、抗體濃度有關(guān)，一般37度1-2h，而4度過(guò)夜和從冰箱拿出后37度復(fù)溫45min。 （2）二抗一般室溫或37度30min-1h，具體時(shí)間需要摸索。細(xì)胞 |
會(huì)員_a.png)